熒光顯微鏡高質(zhì)量成像的五個要點分享
在細(xì)胞生物學(xué)、免疫熒光或腫瘤研究等領(lǐng)域，高質(zhì)量的熒光成像往往是揭示生物學(xué)現(xiàn)象的關(guān)鍵。然而，許多科研工作者在追求完美圖像的路上，常會陷入成像苦惱之中—要不熒光信號偏弱，看不清，要不雜色較多，找不到關(guān)鍵信號。
這些問題的根源，往往不在于樣品制備或設(shè)備本身，而在于幾個重要的成像環(huán)節(jié)設(shè)置。
今天就跟大家分享五個熒光成像必備點，做好后再也不用擔(dān)心拍不出期刊級美圖！
樣品/玻片厚度
包括載玻片、蓋玻片以及切片樣本均不能太厚，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚集。而組織切片太厚的話，容易導(dǎo)致細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蓋，影響判斷。
建議 / Tips
• 載玻片厚度應(yīng)在0.8 ～1.2mm之間，蓋玻片厚度在0.17mm左右。
• 為了加強激發(fā)光，也可用干涉蓋玻片，這是一種特制的表面鍍有若干層對不同波長的光起不同干涉作用的物質(zhì)（如氟化鎂）的蓋玻片，它可以使熒光順利通過。
濾光片匹配：才是關(guān)鍵
不同的熒光染料有不同的激發(fā)/發(fā)射波段，用錯濾光片就等于白拍。
建議 / Tips
• 核對你使用的染料波段，選擇匹配的濾光片組（如FITC: EX490/EM520nm）。
• 尤其是多通道共染樣本，務(wù)必避開光譜重疊，減少串?dāng)_。
熒光淬滅防護
熒光信號在成像過程中衰減過快，通常是光照導(dǎo)致的熒光淬滅所致。這不僅影響圖像質(zhì)量，更可能導(dǎo)致實驗中斷和數(shù)據(jù)丟失。
建議 / Tips
• 使用含DABCO或類似抗淬滅劑的封片液。
• 整個操作流程盡量避光，特別是染色、封片、搬移階段。
• 先拍易淬滅的通道（如Cy5），最后拍DAPI等穩(wěn)定通道。
是否采用了熒光物鏡
熒光物鏡，從字面上來看，就是適合熒光觀察的物鏡，因為這種物鏡生產(chǎn)時使用到了螢石（Fluorite）鏡片，故稱“螢石物鏡"、“熒光物鏡"。
相比普通物鏡，熒光物鏡不僅在熒光觀察中有更好的表現(xiàn)，在明場、暗場等觀察中，它也因為有更高的數(shù)值孔徑、更強的消色差表現(xiàn)，能提供更明亮、更高對比度的清晰成像。
建議 / Tips
關(guān)注物鏡數(shù)值孔徑（NA）：數(shù)值孔徑（NA）值越高，物鏡的集光能力和分辨率就越強。對于熒光成像，應(yīng)優(yōu)先選擇高NA值的物鏡。
熒光光源選對了嗎
熒光圖像的亮度和信噪比，很大程度上取決于激發(fā)光源的強度和穩(wěn)定性。選擇不當(dāng)?shù)墓庠磿䦟?dǎo)致信號弱、曝光時間長、淬滅加劇等一系列問題。
建議 / Tips
• 優(yōu)先考慮大功率LED光源：相較于傳統(tǒng)的汞燈或金屬鹵素?zé)�，LED光源具有獨特優(yōu)勢。
• 亮度與穩(wěn)定性：LED光源瞬時啟動即可達(dá)到額定功率，輸出光強穩(wěn)定，不會如傳統(tǒng)燈泡般隨使用時間衰減，保障了實驗結(jié)果的重復(fù)性。
• 長壽命與低維護：LED壽命長達(dá)數(shù)萬小時，遠(yuǎn)超傳統(tǒng)燈泡，有效降低長期使用和維護成本。
• 快速切換與靈活調(diào)控：LED可進行毫秒級的快速開關(guān)，方便進行多視野、多時間點的活細(xì)胞成像，有效減少不必要的樣品曝光。
產(chǎn)品推薦
倒置熒光顯微鏡MF53-N是明美一款經(jīng)典的研究級倒置熒光顯微鏡，采用優(yōu)異的無限遠(yuǎn)消色差獨立校正光學(xué)系統(tǒng)，配置長工作距離半復(fù)熒光物鏡與大視野目鏡。熒光光源采用明美寬光譜大功率LED光源MG-100。
可配置UV、V、B、G、Y、R等在內(nèi)的多種熒光，觀測DAPI、FITC、TRITC、Alexa Fluor系列、Cy3系列等常見熒光染料，在CTC檢測、FRET、細(xì)胞免疫等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。廣泛應(yīng)用于高校研究室、研究所、醫(yī)院病理科、檢驗科的臨床樣本分析中。
尤其是6孔轉(zhuǎn)盤式熒光附件設(shè)計，不僅實現(xiàn)了濾光片的快速、精準(zhǔn)切換，有效減少串?dāng)_并提升多色成像效率，其穩(wěn)定的光路結(jié)構(gòu)也為獲取一致性高的圖像提供了保障。
MG-150是一款長壽命高效熒光光源，在RGY激發(fā)波段，比汞燈光源的光效能高2倍以上。
• 隨開隨關(guān)，3通道獨立控制，亮度可調(diào)：UV、B、Y三通道亮度均支持0-100%獨立精細(xì)調(diào)節(jié)。
• 智能亮度記憶功能：每個通道亮度可調(diào)并且都能獨立記憶最適亮度參數(shù)，減少熒光淬滅的發(fā)生。
• 高適配性：可適配包括四大品牌在內(nèi)的所有研究級熒光顯微鏡
真實科研案例
在最近一項發(fā)表于國際期刊《Journal of Extracellular Vesicles》的高血壓研究中，中國藥科大學(xué)團隊正是使用明美MF53-N倒置熒光顯微鏡完成了細(xì)胞遷移成像實驗，成功揭示了血管重構(gòu)的新機制，并指出潛在治療靶點！
優(yōu)質(zhì)的熒光成像，是精準(zhǔn)的樣品制備、嚴(yán)格的濾光片匹配、周全的淬滅防護、高性能的熒光物鏡以及穩(wěn)定的激發(fā)光源共同作用的結(jié)果。而像明美MF53-N、MG150這樣性能穩(wěn)定、設(shè)計貼心的成像設(shè)備，正是將這些關(guān)鍵要素系統(tǒng)整合，成為您實驗室中助力高水平研究的“穩(wěn)定輸出基石”。
我們相信，卓越的科研發(fā)現(xiàn)始于可靠的數(shù)據(jù)。如果您希望進一步了解如何優(yōu)化您的熒光成像平臺，歡迎隨時聯(lián)系我們，獲取針對您實驗需求的定制化解決方案與詳細(xì)技術(shù)資料。
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