
基于CERO生物反應(yīng)器建立小鼠aNSC培養(yǎng)體系首次將CERO 生物反應(yīng)器應(yīng)用于小鼠 aNSCs 培養(yǎng)、腦類器官開發(fā)及腦癌組裝體構(gòu)建,通過與傳統(tǒng) 6 孔懸浮培養(yǎng)板、96 孔 ULA 板對比,在可擴展性(單管容量達 5000 萬細胞、支持 200 + 類器官培養(yǎng))、生長動力學(xué)(細胞傳代頻率降低 2-4 倍、類器官尺寸均勻)、長期培養(yǎng)穩(wěn)定性(培養(yǎng)時長超 5 個月,較傳統(tǒng)方法延長 1.6 倍)三大維度展現(xiàn)顯著優(yōu)勢,還成功構(gòu)建出相互連接表面積超 50% 的腦聚集體模型,人工操作減少 50%,為相關(guān)研究提供更可靠的 3D 培養(yǎng)體系。
一、項目概述
項目定位:首次將CERO 生物反應(yīng)器應(yīng)用于小鼠成年神經(jīng)干細胞(aNSCs)培養(yǎng)、腦類器官開發(fā)及腦癌組裝體構(gòu)建,填補其在小鼠 aNSCs 培養(yǎng)中的應(yīng)用空白。
核心背景:傳統(tǒng) 3D 培養(yǎng)方法缺乏高級研究所需的可重復(fù)性,而可重復(fù)的 3R(替代、減少、優(yōu)化)3D 培養(yǎng)系統(tǒng)需求日益迫切,項目與 OLS 合作驗證 CERO 的應(yīng)用價值。

二、核心優(yōu)勢對比(CERO vs 傳統(tǒng)培養(yǎng)方法)
| 對比維度 | 傳統(tǒng)培養(yǎng)方法(6 孔懸浮培養(yǎng)板 / 96 孔 ULA 板) | CERO 3D 培養(yǎng)箱與生物反應(yīng)器 |
|---|---|---|
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可擴展性 |
6 孔板:每孔僅容納 10-30 個類器官,易接觸底板;96 孔板:受孔數(shù)限制,容量小 |
單管培養(yǎng)容量達5000 萬細胞,支持200 + 類器官培養(yǎng),容量較傳統(tǒng)提升 20 倍,無融合風(fēng)險 |
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生長動力學(xué) |
類器官尺寸不均(超 800µm 易呈甜甜圈狀),底部沉積,結(jié)塊 / 扁平化嚴(yán)重,傳代頻繁 |
初始生長緩慢可控,類器官形態(tài)圓潤、尺寸均勻(達 2mm),傳代頻率降低2-4 倍,營養(yǎng)獲取充分 |
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長期培養(yǎng)穩(wěn)定性 |
6 孔板:3 個月后存活率下降,出現(xiàn)凋亡核心,需更換培養(yǎng)基質(zhì);96 孔板:凋亡率高,長期研究可行性低 |
穩(wěn)定培養(yǎng)超5 個月(較傳統(tǒng)延長 1.6 倍),類器官核心持續(xù)增殖,形態(tài)穩(wěn)定,無需更新培養(yǎng)基 |
|
人工操作 |
培養(yǎng)基更換頻繁,操作時間長 |
人工操作減少50%,節(jié)約資源與時間 |
三、腦聚集體培養(yǎng)的關(guān)鍵突破
• 傳統(tǒng)局限:腦類器官與癌細胞球體的共培養(yǎng)模型(腦聚集體)中,兩者接觸面積極低(<10%),無法模擬腦癌被健康腦組織包圍的臨床實際環(huán)境。
• CERO 解決方案:成功構(gòu)建相互連接表面積超過 50% 的聚集體模型,精準(zhǔn)模擬腫瘤侵襲過程(H&E 染色顯示腦類器官向腫瘤組織外側(cè)生長超半數(shù))。
• 性能提升:Ki-67 染色顯示膠質(zhì)瘤及類器官組織均有增殖活性,Cas-3 染色表明細胞凋亡減少,存活率顯著提高,模型更穩(wěn)定持久。
四、操作流程概要
1. 預(yù)培養(yǎng):將先前分化的腦類器官與 GL261 膠質(zhì)瘤球體(10,000 個細胞 / 孔)接種于 96 孔 ULA 板,預(yù)培養(yǎng) 3 天。
2. 共培養(yǎng):轉(zhuǎn)移至新 96 孔 ULA 板,72 小時內(nèi)形成細胞間緊密連接。
3. 分組培養(yǎng):72 小時后,半數(shù)聚集體轉(zhuǎn)移至 CERO 管,另一半保留在 96 孔 ULA 板,繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時(累計 120 小時)。
4. 分析:對組裝體進行固定、切片,采用 H&E、Ki-67(增殖標(biāo)記物)、Cas-3(凋亡標(biāo)記物)染色分析。

五、項目價值
CERO 生物反應(yīng)器顯著提升了類器官和腦聚集體的培養(yǎng)效率與質(zhì)量,減少人工操作,為腦癌等相關(guān)疾病的體內(nèi)研究提供了更貼近臨床實際的替代模型,開辟了新的研究途徑。
關(guān)鍵問題
問題 1:CERO 生物反應(yīng)器在長期培養(yǎng)穩(wěn)定性方面,較傳統(tǒng) 6 孔懸浮培養(yǎng)板有哪些核心提升?
答案:傳統(tǒng) 6 孔懸浮培養(yǎng)板僅能穩(wěn)定培養(yǎng) 3 個月,之后類器官存活率下降、出現(xiàn)凋亡核心;CERO 可實現(xiàn)超 5 個月的穩(wěn)定培養(yǎng)(延長 1.6 倍),類器官保持活性、核心持續(xù)增殖,形態(tài)圓潤均勻,無需更新培養(yǎng)基,大幅提升長期研究的可行性。
2:該項目在腦聚集體培養(yǎng)中,解決了傳統(tǒng)模型的什么核心痛點?實現(xiàn)了怎樣的關(guān)鍵突破?
答案:傳統(tǒng)腦聚集體模型的核心痛點是腦類器官與癌細胞球體接觸面積極低(<10%),無法模擬腦癌被健康腦組織包圍的臨床微環(huán)境;CERO 的關(guān)鍵突破是構(gòu)建出相互連接表面積超過 50% 的聚集體模型,精準(zhǔn)再現(xiàn)腫瘤 - 組織相互作用,且細胞凋亡減少、增殖活性提升,模型穩(wěn)定性更強。
問題 3:CERO 生物反應(yīng)器在可擴展性和人工操作方面,較傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的具體優(yōu)勢數(shù)據(jù)是什么?
答案:可擴展性上,CERO 單管培養(yǎng)容量達5000 萬細胞,支持200 + 類器官培養(yǎng),較 6 孔板(每孔 10-30 個類器官)容量提升 20 倍,單位面積支持的類器官數(shù)量提升 15 倍;人工操作上,較孔板培養(yǎng)減少50% 的培養(yǎng)基更換次數(shù)及操作時間,顯著提升培養(yǎng)效率。
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