D-熒光素鉀鹽的核心作用及在生物發(fā)光實(shí)驗(yàn)等中的應(yīng)用
如果你從事生物實(shí)驗(yàn)，尤其是涉及活體成像、基因表達(dá)檢測(cè)的研究，那大概率會(huì)用到熒光素酶相關(guān)的實(shí)驗(yàn)體系 —— 而愛(ài)必信（Absin）品牌的 D - 熒光素鉀鹽，就是這個(gè)體系里常用的關(guān)鍵底物，今天就來(lái)簡(jiǎn)單介紹下這款實(shí)用的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品。
一、產(chǎn)品基本信息
愛(ài)必信 D - 熒光素鉀鹽（貨號(hào)：abs42075819-1g）有明確的化學(xué)特性和穩(wěn)定的品質(zhì)：
分子式為 C₁₁H₇N₂O₃S₂・K，分子量 318.41，CAS 號(hào) 115144-35-9；
純度＞98%，外觀是淡黃色粉末，易溶于水（溶解度≥30mg/mL），能輕松配制成實(shí)驗(yàn)所需的溶液；
運(yùn)輸需在 2～8℃條件下，固體狀態(tài)下 - 20℃避光保存有效期 1 年，配成溶液后 - 80℃保存有效期 3 個(gè)月，注意避免反復(fù)凍融。
二、它為什么能發(fā)光？
D - 熒光素鉀鹽的核心作用，是作為熒光素酶（Luciferase）的底物產(chǎn)生生物發(fā)光，具體過(guò)程不復(fù)雜：
在有氧環(huán)境下，還有 Mg²⁺和 ATP（三磷酸腺苷）的參與，D - 熒光素鉀鹽會(huì)在熒光素酶的催化下發(fā)生反應(yīng) —— 先生成熒光素 - AMP 復(fù)合體并釋放焦磷酸，接著這個(gè)復(fù)合體再和氧氣反應(yīng)生成氧化熒光素，同時(shí)釋放 CO₂和 H₂O。
而在這個(gè)過(guò)程中，處于 “激發(fā)態(tài)” 的氧化熒光素會(huì)回到穩(wěn)定的 “基態(tài)”，這個(gè)過(guò)程就會(huì)發(fā)出 540-600nm 的藍(lán)綠光。
利用這個(gè)特性，我們可以做很多研究：比如把帶熒光素酶基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)細(xì)胞，再把細(xì)胞導(dǎo)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（像小鼠）體內(nèi)，之后注入 D - 熒光素鉀鹽，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）觀察光的強(qiáng)度，就能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展、藥物治療效果；也能通過(guò) ATP 對(duì)這個(gè)反應(yīng)的影響，判斷實(shí)驗(yàn)體系里的能量或生命體征情況。
三、怎么用？
D - 熒光素鉀鹽主要用于 “體外生物發(fā)光檢測(cè)” 和 “活體成像分析”，兩種場(chǎng)景的操作步驟都比較清晰：
1. 體外生物發(fā)光檢測(cè)（比如細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）
第一步配儲(chǔ)備液：用無(wú)菌純凈水溶解，配成 30mg/mL 的儲(chǔ)備液（濃度是 100-200×），搖勻就能用；用不完的儲(chǔ)備液分裝后，-20℃避光保存，別反復(fù)凍融，不然會(huì)影響活性。
第二步配工作液：把組織培養(yǎng)基在 37℃恒溫下預(yù)熱 10-20 分鐘，再用預(yù)熱好的培養(yǎng)基把儲(chǔ)備液稀釋到 0.15-0.3mg/mL（具體濃度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整），得到工作液。
第三步處理細(xì)胞：去掉細(xì)胞原來(lái)的培養(yǎng)基，加入配好的工作液，在 37℃下孵育 5-10 分鐘，之后就能進(jìn)行圖像分析了。
2. 活體成像分析（比如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）
第一步配儲(chǔ)備液：用不含鈣、鎂離子的無(wú)菌 DPBS 緩沖液溶解，配成 15mg/mL 的儲(chǔ)備液，搖勻后用 0.2μm 水系濾器過(guò)濾除菌；用不完的同樣分裝后 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
第二步注射：給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如小鼠）做腹腔注射，注射劑量按 “150mg/kg 體重” 來(lái)算（比如 20g 的小鼠，就注射 0.2mL 儲(chǔ)備液）。
第三步成像：注射后等 10-15 分鐘，待體內(nèi)光信號(hào)達(dá)到最強(qiáng)且穩(wěn)定的狀態(tài)，再進(jìn)行成像分析。
四、能用來(lái)做什么？
這款產(chǎn)品的應(yīng)用范圍很廣，在生物技術(shù)和相關(guān)領(lǐng)域都很實(shí)用：
首先是活體成像研究：這是它最主要的用途之一，比如監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)、炎癥發(fā)展，或者評(píng)估藥物對(duì)疾病的治療效果，能實(shí)時(shí)看到體內(nèi)的變化。
其次是基因表達(dá)檢測(cè)：如果要檢測(cè)和特定啟動(dòng)子相連的熒光素酶基因的表達(dá)情況，用它作為底物，通過(guò)發(fā)光強(qiáng)度就能判斷基因的表達(dá)水平。
還有免疫測(cè)定：熒光素酶常和抗體結(jié)合做標(biāo)記，而 D - 熒光素鉀鹽就是這個(gè)標(biāo)記的檢測(cè)底物 —— 它的優(yōu)勢(shì)在于，哺乳動(dòng)物組織里的內(nèi)源性熒光素酶活性很低，而且檢測(cè)靈敏度高。
最后是衛(wèi)生監(jiān)測(cè)：比如食品加工廠，用它和熒光素酶的反應(yīng)體系能檢測(cè) ATP（所有生物體都含有 ATP），通過(guò)是否發(fā)光、發(fā)光強(qiáng)度，判斷設(shè)備表面或產(chǎn)品是否有污染，保障食品衛(wèi)生。
五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
用的時(shí)候注意這幾點(diǎn)，能讓實(shí)驗(yàn)更順利、結(jié)果更準(zhǔn)確：
注射方式、動(dòng)物類型、動(dòng)物體重都會(huì)影響發(fā)光信號(hào)，建議每次實(shí)驗(yàn)都做 “熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線”，找到最佳的檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)穩(wěn)定期。
如果要檢測(cè) ATP，一定要避免外源 ATP 污染：操作時(shí)戴手套，用不含 ATP 的實(shí)驗(yàn)耗材，溶解熒光素時(shí)用不含 ATP 的無(wú)菌水。
全程要避光操作、避光保存：儲(chǔ)備液過(guò)濾除菌后分裝到 - 80℃凍存，只能凍融 1 次；有條件的話，給儲(chǔ)備液充氮?dú)饣驓鍤�，能防止氧化，保存時(shí)間能長(zhǎng)達(dá) 1 年。
溶解時(shí)別用含鈣、鎂離子的溶液：一定要用不含鈣、鎂的 DPBS，因?yàn)殁}、鎂可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，還可能影響熒光素的氧化，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果。
操作安全：記得穿實(shí)驗(yàn)服、戴一次性手套，保護(hù)自己的安全和健康。
愛(ài)必信 D - 熒光素鉀鹽憑借 “光易透過(guò)組織、體內(nèi)代謝慢、特異性好” 的優(yōu)勢(shì)，成為了很多活體成像實(shí)驗(yàn)的首選底物，如果你有相關(guān)實(shí)驗(yàn)需求，可以通過(guò)優(yōu)寧維的鏈接了解更多產(chǎn)品詳情或購(gòu)買：https://www.univ-bio.com/d-luciferin-potassium-salt/abs42075819-1g.html
一、產(chǎn)品基本信息
愛(ài)必信 D - 熒光素鉀鹽（貨號(hào)：abs42075819-1g）有明確的化學(xué)特性和穩(wěn)定的品質(zhì)：
分子式為 C₁₁H₇N₂O₃S₂・K，分子量 318.41，CAS 號(hào) 115144-35-9；
純度＞98%，外觀是淡黃色粉末，易溶于水（溶解度≥30mg/mL），能輕松配制成實(shí)驗(yàn)所需的溶液；
運(yùn)輸需在 2～8℃條件下，固體狀態(tài)下 - 20℃避光保存有效期 1 年，配成溶液后 - 80℃保存有效期 3 個(gè)月，注意避免反復(fù)凍融。
二、它為什么能發(fā)光？
D - 熒光素鉀鹽的核心作用，是作為熒光素酶（Luciferase）的底物產(chǎn)生生物發(fā)光，具體過(guò)程不復(fù)雜：
在有氧環(huán)境下，還有 Mg²⁺和 ATP（三磷酸腺苷）的參與，D - 熒光素鉀鹽會(huì)在熒光素酶的催化下發(fā)生反應(yīng) —— 先生成熒光素 - AMP 復(fù)合體并釋放焦磷酸，接著這個(gè)復(fù)合體再和氧氣反應(yīng)生成氧化熒光素，同時(shí)釋放 CO₂和 H₂O。
而在這個(gè)過(guò)程中，處于 “激發(fā)態(tài)” 的氧化熒光素會(huì)回到穩(wěn)定的 “基態(tài)”，這個(gè)過(guò)程就會(huì)發(fā)出 540-600nm 的藍(lán)綠光。
利用這個(gè)特性，我們可以做很多研究：比如把帶熒光素酶基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)細(xì)胞，再把細(xì)胞導(dǎo)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（像小鼠）體內(nèi)，之后注入 D - 熒光素鉀鹽，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）觀察光的強(qiáng)度，就能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展、藥物治療效果；也能通過(guò) ATP 對(duì)這個(gè)反應(yīng)的影響，判斷實(shí)驗(yàn)體系里的能量或生命體征情況。
三、怎么用？
D - 熒光素鉀鹽主要用于 “體外生物發(fā)光檢測(cè)” 和 “活體成像分析”，兩種場(chǎng)景的操作步驟都比較清晰：
1. 體外生物發(fā)光檢測(cè)（比如細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）
第一步配儲(chǔ)備液：用無(wú)菌純凈水溶解，配成 30mg/mL 的儲(chǔ)備液（濃度是 100-200×），搖勻就能用；用不完的儲(chǔ)備液分裝后，-20℃避光保存，別反復(fù)凍融，不然會(huì)影響活性。
第二步配工作液：把組織培養(yǎng)基在 37℃恒溫下預(yù)熱 10-20 分鐘，再用預(yù)熱好的培養(yǎng)基把儲(chǔ)備液稀釋到 0.15-0.3mg/mL（具體濃度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整），得到工作液。
第三步處理細(xì)胞：去掉細(xì)胞原來(lái)的培養(yǎng)基，加入配好的工作液，在 37℃下孵育 5-10 分鐘，之后就能進(jìn)行圖像分析了。
2. 活體成像分析（比如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）
第一步配儲(chǔ)備液：用不含鈣、鎂離子的無(wú)菌 DPBS 緩沖液溶解，配成 15mg/mL 的儲(chǔ)備液，搖勻后用 0.2μm 水系濾器過(guò)濾除菌；用不完的同樣分裝后 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
第二步注射：給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如小鼠）做腹腔注射，注射劑量按 “150mg/kg 體重” 來(lái)算（比如 20g 的小鼠，就注射 0.2mL 儲(chǔ)備液）。
第三步成像：注射后等 10-15 分鐘，待體內(nèi)光信號(hào)達(dá)到最強(qiáng)且穩(wěn)定的狀態(tài)，再進(jìn)行成像分析。
四、能用來(lái)做什么？
這款產(chǎn)品的應(yīng)用范圍很廣，在生物技術(shù)和相關(guān)領(lǐng)域都很實(shí)用：
首先是活體成像研究：這是它最主要的用途之一，比如監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)、炎癥發(fā)展，或者評(píng)估藥物對(duì)疾病的治療效果，能實(shí)時(shí)看到體內(nèi)的變化。
其次是基因表達(dá)檢測(cè)：如果要檢測(cè)和特定啟動(dòng)子相連的熒光素酶基因的表達(dá)情況，用它作為底物，通過(guò)發(fā)光強(qiáng)度就能判斷基因的表達(dá)水平。
還有免疫測(cè)定：熒光素酶常和抗體結(jié)合做標(biāo)記，而 D - 熒光素鉀鹽就是這個(gè)標(biāo)記的檢測(cè)底物 —— 它的優(yōu)勢(shì)在于，哺乳動(dòng)物組織里的內(nèi)源性熒光素酶活性很低，而且檢測(cè)靈敏度高。
最后是衛(wèi)生監(jiān)測(cè)：比如食品加工廠，用它和熒光素酶的反應(yīng)體系能檢測(cè) ATP（所有生物體都含有 ATP），通過(guò)是否發(fā)光、發(fā)光強(qiáng)度，判斷設(shè)備表面或產(chǎn)品是否有污染，保障食品衛(wèi)生。
五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
用的時(shí)候注意這幾點(diǎn)，能讓實(shí)驗(yàn)更順利、結(jié)果更準(zhǔn)確：
注射方式、動(dòng)物類型、動(dòng)物體重都會(huì)影響發(fā)光信號(hào)，建議每次實(shí)驗(yàn)都做 “熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線”，找到最佳的檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)穩(wěn)定期。
如果要檢測(cè) ATP，一定要避免外源 ATP 污染：操作時(shí)戴手套，用不含 ATP 的實(shí)驗(yàn)耗材，溶解熒光素時(shí)用不含 ATP 的無(wú)菌水。
全程要避光操作、避光保存：儲(chǔ)備液過(guò)濾除菌后分裝到 - 80℃凍存，只能凍融 1 次；有條件的話，給儲(chǔ)備液充氮?dú)饣驓鍤�，能防止氧化，保存時(shí)間能長(zhǎng)達(dá) 1 年。
溶解時(shí)別用含鈣、鎂離子的溶液：一定要用不含鈣、鎂的 DPBS，因?yàn)殁}、鎂可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，還可能影響熒光素的氧化，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果。
操作安全：記得穿實(shí)驗(yàn)服、戴一次性手套，保護(hù)自己的安全和健康。
愛(ài)必信 D - 熒光素鉀鹽憑借 “光易透過(guò)組織、體內(nèi)代謝慢、特異性好” 的優(yōu)勢(shì)，成為了很多活體成像實(shí)驗(yàn)的首選底物，如果你有相關(guān)實(shí)驗(yàn)需求，可以通過(guò)優(yōu)寧維的鏈接了解更多產(chǎn)品詳情或購(gòu)買：https://www.univ-bio.com/d-luciferin-potassium-salt/abs42075819-1g.html
| 名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| 百日咳毒素溶液 | abs42024902-0.5mL | 0.5mL |
| D-熒光素鉀鹽 | abs42075819-1g | 1g |
| Protein A/G PLUS-Agarose | sc-2003 | 2ml |
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