輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒使用說明
輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒
一、產(chǎn)品簡介：
輔酶Q(CoenzymeQ，CoQ)是一種生物體內(nèi)廣泛存在的脂溶性醌類化合物，故又稱泛醌，在體內(nèi)呼吸鏈中質(zhì)子移位及電子傳遞中起重要作用，是呼吸鏈中重要的遞氫體，它是細胞呼吸和細胞代謝的激活劑，也是重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強劑。對多種酶有激活作用。不同生物體來源的輔酶Q其側(cè)鏈異戊烯單位的數(shù)目不同，人類和哺乳動物是10個異戊烯單位，故稱輔酶Q10。輔酶Q10是輔酶Q類的重要成員之一，它們與線粒體內(nèi)膜相結(jié)合，廣泛參與體內(nèi)的生物代謝過程。輔酶Q10不僅能給心臟提供動力，還具有卓越的抗氧化，清除自由基功能，能預(yù)防血管壁脂質(zhì)過氧化，預(yù)防動脈粥樣硬化，并且無任何毒副作用。具體作用體現(xiàn)在以下四個方面：
①幫助保護心臟輔酶Q10有助于為心肌提供充足氧氣，預(yù)防突發(fā)性心臟病，尤其在心肌缺氧過程中輔酶Q10發(fā)揮關(guān)鍵性改善作用。
②保護皮膚長期使用輔酶Q10能夠有效防止皮膚衰老，減少臉部皺紋。
③抗疲勞輔酶Q10使細胞保持良好健康的狀態(tài)，因而機體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛。它是細胞自身產(chǎn)生的天然抗氧化劑和細胞代謝啟動劑，具有保護和恢復(fù)生物膜結(jié)構(gòu)的完整性、穩(wěn)定膜電位作用，是機體的非特異性免疫增強劑，因此顯示出極好抗疲勞作用。
④防癌抗癌研究表明，輔酶Q10有抗腫瘤作用，臨床對于晚期轉(zhuǎn)移性癌癥有一定療效。
雅吉生物輔酶Q10(CoQ10)檢測試劑盒(比色法)其檢測原理是待測樣品在堿性條件下，EC取代了CoQ10上的甲氰基，形成藍色化合物，通過分光光度計或酶標儀測定620nm處吸光度值，根據(jù)標準曲線即可測出輔酶Q10的含量。本產(chǎn)品可用于測定花生、牛肉、沙丁魚、保健品等食品中的CoQ10的含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
三、自備材料：
1、無水乙醇
2、比色杯或96孔板
3、分光光度計或酶標儀
四、操作步驟(僅供參考)：
1、稀釋標準品：用EC buffer稀釋CoQ10標準(5mg/ml)至0.5mg/ml，
-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 2、準備樣品：取新鮮動物心臟或肝臟等樣品，采用醇堿皂化法、溶劑皂化法等提取適量的CoQ10提取液，-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 3、CoQ10加樣：按照下表設(shè)置空白、標準和測定，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的CoQ10濃度過高，可適當(dāng)減少樣品用量或用EC buffer稀釋后再進行測定。
輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒
計算：
液體樣品輔酶Q10濃度：CoQ10(mg/ml)=A測定/A標準×0.5
液體樣品輔酶Q10含量：CoQ10(mg)=A測定/A標準×0.5×VT
每100g固體樣品輔酶Q10含量：CoQ10(mg/g)=A測定/A標準×0.5×VT×100/m
式中：A測定=測定管的吸光度
A標準=標準管的吸光度
0.5=CoQ10標準的濃度(mg/ml)
VT=CoQ10提取液的總體積(ml)
m=樣品的實際用量(g)
注意事項：
1、待測樣品中不能含有CoQ10抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。
2、在皂化過程中，震蕩不要劇烈，以免形成乳化層。
3、CoQ10 Assay buffer 如果出現(xiàn)渾濁或絮狀物，應(yīng)棄用。
4、CoQ10標準梯度應(yīng)準確，盡量減少不必要的誤差。
5、EC solution有一定毒性，請小心操作。
6、檢測標準品時，按步驟3表格混合后，2min內(nèi)即出現(xiàn)明顯的藍色變化并逐漸加深，20min后藍色開始變淺，30min 后逐漸呈黃綠色。620nm檢測數(shù)據(jù)表明，隨著時間的延長，OD值在不斷的下降，對應(yīng)的顏色也已發(fā)生變化，特別是高濃度的標準品變化比較大。因此，應(yīng)在出現(xiàn)最深的藍色結(jié)果且穩(wěn)定的時間段內(nèi)盡快檢測，而且建議每次同時檢測標準品(0.3~0.5mg/ml)和樣品。如有條件，最好用酶標儀檢測，減少因檢測時間導(dǎo)致的誤差。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：6 個月有效。
附一：參考標準曲線范圍：
雅吉生物測定CoQ10標準0.04、0.1、0.3、0.5、1、2、5mg/ml在630nm 時吸光度，據(jù)此做出其
附二：CoQ10 的提取方法（來源于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考）
方法一、醇堿皂化法
皂化液的制備 取豬心殘渣，壓干稱重，按干渣重加 300g/L 工業(yè)焦性沒食子酸，攪勻，加醇-堿溶液(干渣重 3~3.5 倍量乙醇、320g/L 氫氧化鈉)，加熱攪拌回流 25~30min，迅速冷卻至室溫，得皂化液。
濃縮液的制備 取皂化液，立即加入其體積 1/10 量的石油醚或 120 號汽油提取 3~4 次，攪拌，分層，得提取液。水洗至近中性，在 40℃以下濃縮至原體積的 1/10，冷卻，-5℃以下靜置過夜，過濾，得濃縮液。
輔酶Q10精制品的制備 將濃縮液過硅膠柱層析，先后用石油醚、10%乙醚-石油醚洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得黃色油狀物。加熱無水乙醇溶解，過濾，濾液靜置，冷卻結(jié)晶，真空干燥，得輔酶Q10 精制品。
方法二、醇醚混合溶劑提取法
輔酶Q10粗制品的制備 取豬心殘渣，加1.5倍量的V乙醇：V乙醚=3：1 混合溶劑，加熱提取3~4 次，每次15~20min，冷至室溫，過濾，合并提取液。濃縮，加適量水，加石油醚提取， 提取液濃縮，濃縮物為黃色油狀物，即輔酶Q10粗制品。
輔酶Q10成品的制備 取輔酶Q10粗制品，加丙酮溶解，置-10℃以下析出雜質(zhì)，過濾，濾液蒸去丙酮，加少量石油醚溶解，過硅膠柱層析分離，加無水乙醇結(jié)晶，得輔酶 Q10 成品。
一、產(chǎn)品簡介：
輔酶Q(CoenzymeQ，CoQ)是一種生物體內(nèi)廣泛存在的脂溶性醌類化合物，故又稱泛醌，在體內(nèi)呼吸鏈中質(zhì)子移位及電子傳遞中起重要作用，是呼吸鏈中重要的遞氫體，它是細胞呼吸和細胞代謝的激活劑，也是重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強劑。對多種酶有激活作用。不同生物體來源的輔酶Q其側(cè)鏈異戊烯單位的數(shù)目不同，人類和哺乳動物是10個異戊烯單位，故稱輔酶Q10。輔酶Q10是輔酶Q類的重要成員之一，它們與線粒體內(nèi)膜相結(jié)合，廣泛參與體內(nèi)的生物代謝過程。輔酶Q10不僅能給心臟提供動力，還具有卓越的抗氧化，清除自由基功能，能預(yù)防血管壁脂質(zhì)過氧化，預(yù)防動脈粥樣硬化，并且無任何毒副作用。具體作用體現(xiàn)在以下四個方面：
①幫助保護心臟輔酶Q10有助于為心肌提供充足氧氣，預(yù)防突發(fā)性心臟病，尤其在心肌缺氧過程中輔酶Q10發(fā)揮關(guān)鍵性改善作用。
②保護皮膚長期使用輔酶Q10能夠有效防止皮膚衰老，減少臉部皺紋。
③抗疲勞輔酶Q10使細胞保持良好健康的狀態(tài)，因而機體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛。它是細胞自身產(chǎn)生的天然抗氧化劑和細胞代謝啟動劑，具有保護和恢復(fù)生物膜結(jié)構(gòu)的完整性、穩(wěn)定膜電位作用，是機體的非特異性免疫增強劑，因此顯示出極好抗疲勞作用。
④防癌抗癌研究表明，輔酶Q10有抗腫瘤作用，臨床對于晚期轉(zhuǎn)移性癌癥有一定療效。
雅吉生物輔酶Q10(CoQ10)檢測試劑盒(比色法)其檢測原理是待測樣品在堿性條件下，EC取代了CoQ10上的甲氰基，形成藍色化合物，通過分光光度計或酶標儀測定620nm處吸光度值，根據(jù)標準曲線即可測出輔酶Q10的含量。本產(chǎn)品可用于測定花生、牛肉、沙丁魚、保健品等食品中的CoQ10的含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
| 名稱規(guī)格 | 50T | 存儲 |
| 試劑(A):CoQ10標準(5mg/ml) | 0.5ml | -20℃避光 |
| 試劑(B):EC solution | 25ml | RT避光 |
| 試劑(C):EC buffer | 100ml | RT |
| 試劑(D):CoQ10 Assay buffer | 25ml | RT |
| 使用說明書 | 一份 | |
三、自備材料：
1、無水乙醇
2、比色杯或96孔板
3、分光光度計或酶標儀
四、操作步驟(僅供參考)：
1、稀釋標準品：用EC buffer稀釋CoQ10標準(5mg/ml)至0.5mg/ml，
-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 2、準備樣品：取新鮮動物心臟或肝臟等樣品，采用醇堿皂化法、溶劑皂化法等提取適量的CoQ10提取液，-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 3、CoQ10加樣：按照下表設(shè)置空白、標準和測定，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的CoQ10濃度過高，可適當(dāng)減少樣品用量或用EC buffer稀釋后再進行測定。
輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒
| 普通分光光度計(2ml比色杯)CoQ10測定 | |||
| 加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
| EC buffer | 2 | 1.75 | 1.75 |
| CoQ10標準(0.5mg/ml) | — | 0.25 | — |
| 待測樣品(提取液) | — | — | 0.25 |
| EC solution | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| CoQ10 Assay buffer | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 酶標儀CoQ10測定 | |||
| 加入物(μl) | 空白孔 | 標準孔 | 待測孔 |
| EC buffer | 200 | 175 | 175 |
| CoQ10標準(0.5mg/ml) | - | 25 | - |
| 待測樣品(提取液) | - | - | 25 |
| EC solution | 50 | 50 | 50 |
| CoQ10 Assay buffer | 50 | 50 | 50 |
- CoQ10測定：混勻，室溫避光孵育3~5min，以空白管調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計或酶標儀600~640nm處測定標準管或測定管的吸光度。
計算：
液體樣品輔酶Q10濃度：CoQ10(mg/ml)=A測定/A標準×0.5
液體樣品輔酶Q10含量：CoQ10(mg)=A測定/A標準×0.5×VT
每100g固體樣品輔酶Q10含量：CoQ10(mg/g)=A測定/A標準×0.5×VT×100/m
式中：A測定=測定管的吸光度
A標準=標準管的吸光度
0.5=CoQ10標準的濃度(mg/ml)
VT=CoQ10提取液的總體積(ml)
m=樣品的實際用量(g)
注意事項：
1、待測樣品中不能含有CoQ10抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。
2、在皂化過程中，震蕩不要劇烈，以免形成乳化層。
3、CoQ10 Assay buffer 如果出現(xiàn)渾濁或絮狀物，應(yīng)棄用。
4、CoQ10標準梯度應(yīng)準確，盡量減少不必要的誤差。
5、EC solution有一定毒性，請小心操作。
6、檢測標準品時，按步驟3表格混合后，2min內(nèi)即出現(xiàn)明顯的藍色變化并逐漸加深，20min后藍色開始變淺，30min 后逐漸呈黃綠色。620nm檢測數(shù)據(jù)表明，隨著時間的延長，OD值在不斷的下降，對應(yīng)的顏色也已發(fā)生變化，特別是高濃度的標準品變化比較大。因此，應(yīng)在出現(xiàn)最深的藍色結(jié)果且穩(wěn)定的時間段內(nèi)盡快檢測，而且建議每次同時檢測標準品(0.3~0.5mg/ml)和樣品。如有條件，最好用酶標儀檢測，減少因檢測時間導(dǎo)致的誤差。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：6 個月有效。
附一：參考標準曲線范圍：
雅吉生物測定CoQ10標準0.04、0.1、0.3、0.5、1、2、5mg/ml在630nm 時吸光度，據(jù)此做出其
附二：CoQ10 的提取方法（來源于網(wǎng)絡(luò)，僅供參考）
方法一、醇堿皂化法
皂化液的制備 取豬心殘渣，壓干稱重，按干渣重加 300g/L 工業(yè)焦性沒食子酸，攪勻，加醇-堿溶液(干渣重 3~3.5 倍量乙醇、320g/L 氫氧化鈉)，加熱攪拌回流 25~30min，迅速冷卻至室溫，得皂化液。
濃縮液的制備 取皂化液，立即加入其體積 1/10 量的石油醚或 120 號汽油提取 3~4 次，攪拌，分層，得提取液。水洗至近中性，在 40℃以下濃縮至原體積的 1/10，冷卻，-5℃以下靜置過夜，過濾，得濃縮液。
輔酶Q10精制品的制備 將濃縮液過硅膠柱層析，先后用石油醚、10%乙醚-石油醚洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得黃色油狀物。加熱無水乙醇溶解，過濾，濾液靜置，冷卻結(jié)晶，真空干燥，得輔酶Q10 精制品。
方法二、醇醚混合溶劑提取法
輔酶Q10粗制品的制備 取豬心殘渣，加1.5倍量的V乙醇：V乙醚=3：1 混合溶劑，加熱提取3~4 次，每次15~20min，冷至室溫，過濾，合并提取液。濃縮，加適量水，加石油醚提取， 提取液濃縮，濃縮物為黃色油狀物，即輔酶Q10粗制品。
輔酶Q10成品的制備 取輔酶Q10粗制品，加丙酮溶解，置-10℃以下析出雜質(zhì)，過濾，濾液蒸去丙酮，加少量石油醚溶解，過硅膠柱層析分離，加無水乙醇結(jié)晶，得輔酶 Q10 成品。
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