Pipetty 電動(dòng)移液器在食品甲醛含量測(cè)定中的應(yīng)用(液相色譜法）
方案摘要：本方案適配 Pipetty Pro非等量電動(dòng)移液器，精準(zhǔn)檢測(cè)食品、酒類等樣品中甲醛。Pipetty 以高精度、防交叉污染及溫度補(bǔ)償設(shè)計(jì)，貫穿關(guān)鍵環(huán)節(jié)：試劑配制時(shí)精準(zhǔn)量取磷酸等試劑，保障緩沖液 pH 穩(wěn)定；在標(biāo)準(zhǔn)中間液制備中，精準(zhǔn)移取標(biāo)準(zhǔn)液稀釋，規(guī)避濃度偏差。標(biāo)準(zhǔn)曲線配制憑借非等量移液功能，一次性完成梯度移取，確保 R²≥0.999。適配食品企業(yè)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)批量檢測(cè)需求。
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
在一定溫度下,試樣中的甲醛與衍生劑 2,4-二硝基苯肼(DNPH)反應(yīng)生成甲醛 2,4-二硝基苯腙,凈化提取后,經(jīng)液相色譜分離,二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：
① 高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器;
② 電子天平:感量為 1 mg;
③ 恒溫水浴振蕩器:可控溫度 25 ℃±1℃,精度為 0.1℃;
④ 渦旋混合器;
⑤ 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥4 000 r/min;
⑥ 0.45μm 有機(jī)系濾膜;
⑦ Pipetty Pro非等量電動(dòng)移液器MSIC12-01-1000。
2、試劑和材料
① 乙腈(C2H3N):色譜純;
② 磷酸( H3PO4);
③ 磷酸氫二鈉(Na2HPO4);
④ 2,4-二硝基苯肼(C6H6N4O4);
⑤ 氯化鈉(NaCl)。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、試樣制備
① 固體試樣：取可食部分，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)處理成均勻試樣，裝入潔凈密封容器并做好標(biāo)識(shí)，冷藏（2℃~8℃）保存，避免試樣變質(zhì)。
② 液體試樣：密封保存，測(cè)試前用渦旋振蕩器混勻；含二氧化碳的試樣，采用中速濾紙過濾去除二氧化碳，確保試樣均一性。
2、試樣分析
① 酒類樣品：用 Pipetty 電動(dòng)移液器精準(zhǔn)吸取 5.00 mL 試樣，注入 50 mL 塑料離心管中。蓋緊管蓋后渦旋混勻，將離心管置于恒溫水浴振蕩器中，在 25℃±1℃條件下振搖 1 h。
② 向衍生后的試液中立即加入 8 g 氯化鈉，渦旋混勻 30 s，以不低于 4000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心 5 min。向離心管中再次加入 10 mL 乙腈，渦旋混勻 30 s 后，同條件離心 5 min，收集上層溶液并合并至容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻。將合并后的溶液通過 0.45 μm 有機(jī)系濾膜過濾，濾液供高效液相色譜（HPLC）測(cè)定。
3、設(shè)立空白試驗(yàn)，空白對(duì)照除不加試樣外，其余操作步驟完全參照 上述步驟執(zhí)行。
4、儀器參考條件
色譜柱：C18 柱（柱長(zhǎng) 250 mm，內(nèi)徑 4.6 mm，粒徑 5 μm）或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。
流動(dòng)相：乙腈 - 水（50:50，體積比），建議使用色譜純?cè)噭�，�?jīng) 0.45 μm 濾膜過濾并超聲脫氣后使用。
柱溫：30℃。
檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm。
流速：1 mL/min。
進(jìn)樣量：20 μL。
5、通過Pipetty Pro電動(dòng)移液器分別精準(zhǔn)吸取 100 mg/L 甲醛標(biāo)準(zhǔn)中間液 0 mL、0.050 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL 和 0.80 mL，注入 7 個(gè) 50 mL 塑料離心管中，按照 3.2 的衍生和提取步驟處理，得到質(zhì)量濃度分別為 0 mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L 和 4.0 mg/L 的甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液按濃度由低到高依次注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、將試樣溶液注入液相色譜儀中,得到相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中甲醛的濃度。
注:衍生后所得樣液應(yīng)在24h內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
四、數(shù)據(jù)處理
1、試樣樣中甲醛的含量按式（2）計(jì)算。
2、在重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。
3、酒類樣品,當(dāng)取樣量為5 mL時(shí),本方法的檢出限為 0.3 mg/L,定量限為 1.0 mg/L。
其他樣品,當(dāng)取樣量為2g時(shí),本方法的檢出限為 1.5 mg/kg,定量限為 5.0 mg/kg。
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
在一定溫度下,試樣中的甲醛與衍生劑 2,4-二硝基苯肼(DNPH)反應(yīng)生成甲醛 2,4-二硝基苯腙,凈化提取后,經(jīng)液相色譜分離,二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：
① 高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器;
② 電子天平:感量為 1 mg;
③ 恒溫水浴振蕩器:可控溫度 25 ℃±1℃,精度為 0.1℃;
④ 渦旋混合器;
⑤ 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥4 000 r/min;
⑥ 0.45μm 有機(jī)系濾膜;
⑦ Pipetty Pro非等量電動(dòng)移液器MSIC12-01-1000。
2、試劑和材料
① 乙腈(C2H3N):色譜純;
② 磷酸( H3PO4);
③ 磷酸氫二鈉(Na2HPO4);
④ 2,4-二硝基苯肼(C6H6N4O4);
⑤ 氯化鈉(NaCl)。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、試樣制備
① 固體試樣：取可食部分，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)處理成均勻試樣，裝入潔凈密封容器并做好標(biāo)識(shí)，冷藏（2℃~8℃）保存，避免試樣變質(zhì)。
② 液體試樣：密封保存，測(cè)試前用渦旋振蕩器混勻；含二氧化碳的試樣，采用中速濾紙過濾去除二氧化碳，確保試樣均一性。
2、試樣分析
① 酒類樣品：用 Pipetty 電動(dòng)移液器精準(zhǔn)吸取 5.00 mL 試樣，注入 50 mL 塑料離心管中。蓋緊管蓋后渦旋混勻，將離心管置于恒溫水浴振蕩器中，在 25℃±1℃條件下振搖 1 h。
② 向衍生后的試液中立即加入 8 g 氯化鈉，渦旋混勻 30 s，以不低于 4000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心 5 min。向離心管中再次加入 10 mL 乙腈，渦旋混勻 30 s 后，同條件離心 5 min，收集上層溶液并合并至容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻。將合并后的溶液通過 0.45 μm 有機(jī)系濾膜過濾，濾液供高效液相色譜（HPLC）測(cè)定。
3、設(shè)立空白試驗(yàn)，空白對(duì)照除不加試樣外，其余操作步驟完全參照 上述步驟執(zhí)行。
4、儀器參考條件
色譜柱：C18 柱（柱長(zhǎng) 250 mm，內(nèi)徑 4.6 mm，粒徑 5 μm）或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。
流動(dòng)相：乙腈 - 水（50:50，體積比），建議使用色譜純?cè)噭�，�?jīng) 0.45 μm 濾膜過濾并超聲脫氣后使用。
柱溫：30℃。
檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm。
流速：1 mL/min。
進(jìn)樣量：20 μL。
5、通過Pipetty Pro電動(dòng)移液器分別精準(zhǔn)吸取 100 mg/L 甲醛標(biāo)準(zhǔn)中間液 0 mL、0.050 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL 和 0.80 mL，注入 7 個(gè) 50 mL 塑料離心管中，按照 3.2 的衍生和提取步驟處理，得到質(zhì)量濃度分別為 0 mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L 和 4.0 mg/L 的甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液按濃度由低到高依次注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、將試樣溶液注入液相色譜儀中,得到相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中甲醛的濃度。
注:衍生后所得樣液應(yīng)在24h內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
四、數(shù)據(jù)處理
1、試樣樣中甲醛的含量按式（2）計(jì)算。
2、在重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。
3、酒類樣品,當(dāng)取樣量為5 mL時(shí),本方法的檢出限為 0.3 mg/L,定量限為 1.0 mg/L。
其他樣品,當(dāng)取樣量為2g時(shí),本方法的檢出限為 1.5 mg/kg,定量限為 5.0 mg/kg。
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