前言
做磷酸化蛋白檢測(cè)的小伙伴應(yīng)該會(huì)有這樣的體驗(yàn):剛覺(jué)得自己的Western Blot技能已經(jīng)“通關(guān)”,磷酸化蛋白檢測(cè)這個(gè)“隱藏關(guān)卡”就給了一次“血條見(jiàn)底”的體驗(yàn)。為什么磷酸化蛋白檢測(cè)難度這么大呢,我們一探究竟。
什么是蛋白磷酸化?
蛋白磷酸化是一種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是指在激酶的催化作用下,將ATP的磷酸根基團(tuán),轉(zhuǎn)移到蛋白的氨基酸側(cè)鏈上,這個(gè)過(guò)程一般是可逆的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種動(dòng)態(tài)的生物調(diào)節(jié)過(guò)程,磷酸化涉及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)活動(dòng)、肌肉收縮以及細(xì)胞的增殖、發(fā)育和分化等生理病理過(guò)程。

WB-蛋白磷酸化檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)
Western Blot是定性檢測(cè)蛋白質(zhì)磷酸化水平的金標(biāo)準(zhǔn)。然而在使用WB方法檢測(cè)磷酸化蛋白時(shí),我們會(huì)發(fā)現(xiàn),想要做好磷酸化蛋白的檢測(cè)卻并非易事,原因在于:
☑ 磷酸化蛋白的表達(dá)豐度較低,一般只有總蛋白量的10%,甚至更低,曝了半天膜,條帶依然若隱若現(xiàn)…
☑ 好不容易拍出條帶,強(qiáng)信號(hào)又容易飽和溢出,弱信號(hào)卻模糊不清,動(dòng)態(tài)范圍窄導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。
☑ 目標(biāo)信號(hào)淹沒(méi)在雜亂的背景中,難以分辨。
ONEblot Pro近場(chǎng)高感光化學(xué)發(fā)光成像儀
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☑ 高靈敏: 采用Lens-free無(wú)透鏡成像技術(shù),靈敏度提高2個(gè)數(shù)量級(jí)相比于傳統(tǒng)CCD成像,哪怕是低表達(dá)磷酸化蛋白的微弱信號(hào),也能精準(zhǔn)捕捉。
☑ 高清晰: 極低的背景噪音,確保每一條磷酸化條帶都清晰可辨,定量結(jié)果更可靠。彩虹 Marker 成像,分子量標(biāo)準(zhǔn)彩色顯示,條帶清晰可辨,方便快速比對(duì)磷酸化蛋白條帶位置。
☑ 高效率:擁有6 OD 超寬動(dòng)態(tài)范圍,一次曝光,同時(shí)捕獲磷酸化蛋白的微弱信號(hào)與內(nèi)參蛋白的強(qiáng)勁信號(hào),讓磷酸化蛋白的定量分析更準(zhǔn)確。
☑ 智能化:一鍵三圖。樣本圖 + Marker 圖 + 整合圖,不用反復(fù)優(yōu)化參數(shù),大幅提升實(shí)驗(yàn)效率。
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