Pipetty 電動移液器在啤酒甲醛含量測定中的應(yīng)用
方案摘要：本實(shí)驗(yàn)步驟結(jié)合Pipetty Pro非等量電動移液器的非等量精準(zhǔn)移液、操作省力及防污染設(shè)計等優(yōu)點(diǎn)，對啤酒中甲醛含量檢測流程進(jìn)行優(yōu)化，旨在提升移液精度、降低人為誤差、提高實(shí)驗(yàn)效率，適用于批量樣品檢測及精準(zhǔn)分析場景。
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
樣品經(jīng)水蒸氣蒸餾,餾出液中的甲醛與乙酰丙酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì),在 415 nm 處有最大吸收,在定范圍內(nèi),其吸光度值與甲醛含量成正比。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：
① 分光光度計；
② 水蒸氣蒸餾裝置；
③ 水浴鍋:可控溫度 100℃±1℃,精度為0.1 ℃；
④ Pipetty Pro 非等量電動移液器MSIC12-01-1000。
2、試劑和材料
① 冰乙酸(C2H4O2)；
② 乙酰丙酮(C5H8O2)；
③ 乙酸銨(C2H7O2N)；
④ 磷酸(H3PO4)；
⑤ 二甲基硅油；
⑥ 試樣：密封保存的啤酒樣品（不少于100mL）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、試劑配置
① 乙酰丙酮溶液：稱取25.0g乙酸銨溶于90mL超純水中，攪拌至完全溶解；使用Pipetty電動移液器，精準(zhǔn)吸取0.4mL乙酰丙酮，緩慢注入上述溶液中；吸取3.0mL冰乙酸注入溶液，攪拌混勻后用超純水稀釋至100mL，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中備用。
② 磷酸溶液：稱取20g磷酸溶于80mL超純水中，攪拌均勻后稀釋至100mL，混勻后備用。
③ 甲醛標(biāo)準(zhǔn)中間液：取10mL容量瓶，加入少量超純水；使用Pipetty電動移液器吸取1.00mL 1000mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，緩慢注入容量瓶中，避免溶液濺壁；用超純水定容至刻度，混勻后轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，標(biāo)注信息后冷藏保存。
④ 甲醛標(biāo)準(zhǔn)工作液：取100mL容量瓶，加入少量超純水；使用Pipetty吸取1.0mL 100mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)中間液注入容量瓶；超純水定容至刻度，混勻后備用。
⑤ 甲醛系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：取7支25mL具塞比色管，依次編號為0-6號；使用PipettyPRO“非等量連續(xù)移液”功能，預(yù)先在儀器中輸入移液體積序列：0mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、8.0mL、10.0mL；從1號管開始，按預(yù)設(shè)序列依次吸取1.0mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)工作液注入對應(yīng)比色管中（0號管不吸液，作為空白），每移液一次后儀器自動切換至下一體積，無需手動調(diào)整量程，減少操作誤差；向各比色管中加入超純水至10mL刻度線，混勻后備用。
2、試樣處理
① 啤酒試樣開封后立即搖勻，用中速濾紙過濾去除二氧化碳，收集濾液至潔凈燒杯中；取500mL蒸餾瓶，加入20mL磷酸溶液、1mL二甲基硅油及50mL超純水，備用。
② 吸取25.00mL過濾后的啤酒試樣，緩慢注入蒸餾瓶中，連接水蒸氣蒸餾裝置；預(yù)先在250mL接收瓶中加入10mL超純水，將接收管插入液面下并置于冰浴中，啟動蒸餾；
收集餾出液約195mL時停止蒸餾，室溫放置30min后轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中，超純水定容至刻度，混勻；吸取10.0mL上述餾出液注入25mL具塞比色管中。
3、顯色與檢測
① 使用Pipetty，向裝有餾出液的比色管及7支系列標(biāo)準(zhǔn)工作液比色管中各加入1.0mL乙酰丙酮溶液；蓋緊比色管塞，充分混勻后置于沸水浴中加熱5min，取出后冷卻至室溫。
② 用水替代啤酒試樣，設(shè)置空白試驗(yàn)組。
③ 將甲醛系列標(biāo)準(zhǔn)工作液與試樣同時同樣處理；冷卻至室溫后,置于1cm 比色皿中,以甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的零點(diǎn)為參比調(diào)零,于415 nm 測定吸光度值:以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo),以其吸光度值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
④ 將上述所得溶液置于1cm 比色皿中,于 415 nm 測定吸光度值;若樣品測得結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)線性范圍,則用空自試樣溶液稀釋后再進(jìn)行測定。
注:所得樣液應(yīng)在1h內(nèi)進(jìn)行測定。
四、數(shù)據(jù)處理
1、試樣樣中甲醛的含量按式（1）計算。
2、在重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。
3、當(dāng)取樣量為 25.00 m 時,本方法的檢出限為 0.4 mg/L,定量限為 1.2 mg/L。
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
樣品經(jīng)水蒸氣蒸餾,餾出液中的甲醛與乙酰丙酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì),在 415 nm 處有最大吸收,在定范圍內(nèi),其吸光度值與甲醛含量成正比。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：
① 分光光度計；
② 水蒸氣蒸餾裝置；
③ 水浴鍋:可控溫度 100℃±1℃,精度為0.1 ℃；
④ Pipetty Pro 非等量電動移液器MSIC12-01-1000。
2、試劑和材料
① 冰乙酸(C2H4O2)；
② 乙酰丙酮(C5H8O2)；
③ 乙酸銨(C2H7O2N)；
④ 磷酸(H3PO4)；
⑤ 二甲基硅油；
⑥ 試樣：密封保存的啤酒樣品（不少于100mL）。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、試劑配置
① 乙酰丙酮溶液：稱取25.0g乙酸銨溶于90mL超純水中，攪拌至完全溶解；使用Pipetty電動移液器，精準(zhǔn)吸取0.4mL乙酰丙酮，緩慢注入上述溶液中；吸取3.0mL冰乙酸注入溶液，攪拌混勻后用超純水稀釋至100mL，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中備用。
② 磷酸溶液：稱取20g磷酸溶于80mL超純水中，攪拌均勻后稀釋至100mL，混勻后備用。
③ 甲醛標(biāo)準(zhǔn)中間液：取10mL容量瓶，加入少量超純水；使用Pipetty電動移液器吸取1.00mL 1000mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，緩慢注入容量瓶中，避免溶液濺壁；用超純水定容至刻度，混勻后轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，標(biāo)注信息后冷藏保存。
④ 甲醛標(biāo)準(zhǔn)工作液：取100mL容量瓶，加入少量超純水；使用Pipetty吸取1.0mL 100mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)中間液注入容量瓶；超純水定容至刻度，混勻后備用。
⑤ 甲醛系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：取7支25mL具塞比色管，依次編號為0-6號；使用PipettyPRO“非等量連續(xù)移液”功能，預(yù)先在儀器中輸入移液體積序列：0mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、8.0mL、10.0mL；從1號管開始，按預(yù)設(shè)序列依次吸取1.0mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)工作液注入對應(yīng)比色管中（0號管不吸液，作為空白），每移液一次后儀器自動切換至下一體積，無需手動調(diào)整量程，減少操作誤差；向各比色管中加入超純水至10mL刻度線，混勻后備用。
2、試樣處理
① 啤酒試樣開封后立即搖勻，用中速濾紙過濾去除二氧化碳，收集濾液至潔凈燒杯中；取500mL蒸餾瓶，加入20mL磷酸溶液、1mL二甲基硅油及50mL超純水，備用。
② 吸取25.00mL過濾后的啤酒試樣，緩慢注入蒸餾瓶中，連接水蒸氣蒸餾裝置；預(yù)先在250mL接收瓶中加入10mL超純水，將接收管插入液面下并置于冰浴中，啟動蒸餾；
收集餾出液約195mL時停止蒸餾，室溫放置30min后轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中，超純水定容至刻度，混勻；吸取10.0mL上述餾出液注入25mL具塞比色管中。
3、顯色與檢測
① 使用Pipetty，向裝有餾出液的比色管及7支系列標(biāo)準(zhǔn)工作液比色管中各加入1.0mL乙酰丙酮溶液；蓋緊比色管塞，充分混勻后置于沸水浴中加熱5min，取出后冷卻至室溫。
② 用水替代啤酒試樣，設(shè)置空白試驗(yàn)組。
③ 將甲醛系列標(biāo)準(zhǔn)工作液與試樣同時同樣處理；冷卻至室溫后,置于1cm 比色皿中,以甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的零點(diǎn)為參比調(diào)零,于415 nm 測定吸光度值:以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo),以其吸光度值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
④ 將上述所得溶液置于1cm 比色皿中,于 415 nm 測定吸光度值;若樣品測得結(jié)果超出標(biāo)準(zhǔn)線性范圍,則用空自試樣溶液稀釋后再進(jìn)行測定。
注:所得樣液應(yīng)在1h內(nèi)進(jìn)行測定。
四、數(shù)據(jù)處理
1、試樣樣中甲醛的含量按式（1）計算。
2、在重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。
3、當(dāng)取樣量為 25.00 m 時,本方法的檢出限為 0.4 mg/L,定量限為 1.2 mg/L。
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