蛋白提�。ê说鞍住|(zhì)蛋白和膜蛋白）的實(shí)驗(yàn)原理及步驟
一、實(shí)驗(yàn)原理
蛋白提取試劑盒通過溫和裂解細(xì)胞或組織釋放總蛋白，并利用特異性結(jié)合、離心分離及緩沖液洗脫等技術(shù)去除雜質(zhì)（如核酸、脂類等），最終獲得高純度、高活性的目標(biāo)蛋白。
核心步驟：
1、裂解：裂解液（含去污劑、蛋白酶抑制劑等）破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，釋放胞內(nèi)蛋白；
2、離心去除碎片：高速離心去除未裂解的細(xì)胞碎片、細(xì)胞核及大分子雜質(zhì)；
3、蛋白純化：通過離心柱或特異性結(jié)合樹脂選擇性吸附蛋白，雜質(zhì)隨廢液排出；
4、洗脫：低鹽緩沖液或去離子水洗脫目標(biāo)蛋白，避免變性。
二、材料準(zhǔn)備
試劑盒：蛋白提取試劑盒 （適用于各種動物、植物細(xì)胞和組織細(xì)菌樣本）
自備材料：
- 新鮮樣本（細(xì)胞、組織等）
- 預(yù)冷 PBS 緩沖液 （貨號：abs962）
- 離心機(jī)（可達(dá)到12,000xg）
- 冰盒或低溫操作臺
- 渦旋振蕩器 （貨號：abs72001）
- BCA 蛋白定量試劑盒 （貨號：abs9232）
- 液氮（組織樣本需速凍）
三、實(shí)驗(yàn)步驟 （裂解蛋白所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行）
1、樣本處理
- 細(xì)胞樣本：離心收集細(xì)胞（1500xg, 3min），PBS 洗滌 2 次，吸盡殘留液體。
- 組織樣本：切取 10–50 mg，液氮速凍后研磨成粉末。
- 加入 200-500μL 預(yù)冷裂解液（含蛋白酶抑制劑），渦旋混勻。
- 冰上裂解 20-30 分鐘，每隔 5 分鐘渦旋 10 秒。
3、離心去碎片
- 12,000xg、4℃ 離心 10 分鐘，取上清（即為總蛋白）轉(zhuǎn)移至新離心管。
-核蛋白需先分離細(xì)胞核：低滲裂解后離心收集核沉淀，再溶解。
4、蛋白純化
（注：下游做質(zhì)譜或酶活性分析需要4、5步）
- 將離心柱用平衡緩沖液預(yù)處理 5 分鐘，離心棄廢液。
- 將裂解液上清加入離心柱，12,000 xg 離心 1 分鐘，棄廢液。
- 加入洗滌緩沖液 500 μL，離心 1 分鐘，重復(fù) 2 次。
5、洗脫蛋白
- 加入 50–100 μL 洗脫緩沖液，靜置 2 分鐘后離心 1 分鐘，收集洗脫液（即目標(biāo)蛋白）。
6、蛋白保存
- 將提取的蛋白樣品分裝到小離心管中，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求短期保存在 - 20°C 或長期保存在 - 80°C 冰箱中，避免反復(fù)凍融。
四、結(jié)果分析
1、濃度測定：
- 使用 BCA 法測定蛋白濃度，OD562 計(jì)算濃度（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）。
2、純度評估：
- 分光光度計(jì)檢測 A₂₆₀/A₂₈₀ 比值（理想值 1.8–2.0，若 >2.0 提示核酸殘留）。
3、電泳驗(yàn)證：
- SDS-PAGE 電泳檢測條帶清晰度，無拖尾或雜帶表明純度較高。
五、常見問題及解決方案
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問題 |
可能原因 |
解決方案 |
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蛋白得率低 |
裂解不充分或蛋白酶降解 |
延長裂解時(shí)間，增加裂解液體積；確保添加蛋白酶抑制劑 |
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洗脫液雜質(zhì)多 |
洗滌步驟不徹底 |
增加洗滌次數(shù)或延長離心時(shí)間 |
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蛋白濃度過高/過低 |
樣本量不匹配或洗脫體積不當(dāng) |
調(diào)整樣本量與裂解液比例，優(yōu)化洗脫體積 |
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A₂₆₀/A₂₈₀ 比值異常 |
核酸或鹽離子殘留 |
增加洗滌次數(shù)，或使用核酸酶預(yù)處理樣本 |
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電泳條帶模糊 |
蛋白降解或SDS未充分結(jié)合 |
全程低溫操作，電泳前煮沸樣本 5 分鐘 |
六、注意事項(xiàng)
1、全程低溫操作（冰上或4℃環(huán)境），防止蛋白降解；
2、裂解液需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免反復(fù)凍融；
3、組織樣本需充分勻漿，避免未裂解細(xì)胞殘留。
通過本方案，可高效提取高純度蛋白，適用于 Western Blot、ELISA、質(zhì)譜分析等下游實(shí)驗(yàn)。
Absin蛋白提取試劑盒相關(guān)產(chǎn)品
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蛋白組實(shí)驗(yàn)，質(zhì)譜適用 |
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蛋白質(zhì)組學(xué)樣本前處理試劑盒 |
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總蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用） |
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植物蛋白提取試劑盒(蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用) |
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植物核蛋白提取試劑盒(酶法，蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用） |
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植物核蛋白提取試劑盒(非酶法，蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用） |
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動物/組織蛋白提取試劑盒 |
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核蛋白提取試劑盒（無去垢劑） |
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核蛋白提取試劑盒 |
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高爾基體蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（pull-down、co-IP等）） |
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高爾基體蛋白提取試劑盒 |
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液體樣本蛋白提取試劑盒 |
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脂肪組織蛋白提取試劑盒（脫脂柱法） |
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脂肪組織蛋白提取試劑盒 |
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內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒 |
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全血蛋白提取試劑盒（Pull-down、co-IP等） |
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全血蛋白提取試劑盒 |
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腦組織蛋白提取試劑盒 |
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細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 |
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總蛋白提取試劑盒(蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等）) |
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石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒 |
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骨組織蛋白提取試劑盒 |
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血清蛋白提取試劑盒 |
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溶酶體蛋白提取試劑盒 |
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細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒 |
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線粒體蛋白提取試劑盒 |
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動物組蛋白提取試劑盒 |
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血漿低豐度蛋白富集磁珠試劑盒 |
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磷酸肽蛋白（肽段）提取試劑盒 |
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血小板蛋白提取試劑盒 |
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血小板膜蛋白提取試劑盒 |
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細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒 |
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細(xì)胞漿、細(xì)胞核及細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒 |
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植物蛋白提取試劑盒 |
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植物蛋白提取試劑盒 |
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植物蛋白提取試劑盒 蛋白相互作用適用（pull-down，CO-IP等） |
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植物蛋白提取試劑盒（去葉綠素） |
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植物蛋白提取試劑盒(無去垢劑) |
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植物膜蛋白提取試劑盒 |
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植物核蛋白提取試劑盒（酶法） |
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植物核蛋白提取試劑盒(非酶法) |
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植物核蛋白提取試劑盒(酶法，pu11-down適用) |
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植物核蛋白提取試劑盒(非酶法，pu11-down適用） |
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植物核蛋白提取試劑盒(酶法，無去垢劑) |
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植物核蛋白提取試劑盒(非酶法，無去垢劑) |
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植物核蛋白提取試劑盒(蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)、Pu11-down適用） |
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植物磷酸化蛋白提取試劑盒 |
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植物根莖蛋白提取試劑盒 |
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葉綠體蛋白提取試劑盒 |
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細(xì)菌蛋白提取試劑盒 |
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細(xì)菌蛋白提取試劑盒 |
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細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒 |
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一步法細(xì)菌活性蛋白提取試劑盒 |
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標(biāo)簽：
蛋白提取
- 多肽-藥物偶聯(lián)物通過點(diǎn)擊化學(xué)手柄氨基酸構(gòu)建精準(zhǔn)靶向的PDCs
- 類肽與非天然多聚物基于天然骨架的分子設(shè)計(jì)與功能拓展
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