Pipetty電動移液器在肝素凝血時間測定（血漿復鈣法）中的應用
方案摘要：本方案旨在檢測肝素抗凝活性，為提升實驗室液體處理的精準性與效率，引入 Pipetty 電動移液器。依托其專利溫度控制技術，通過內置傳感器實時校正手部熱量導致的誤差，完美適配高精度實驗需求。筆式操作設計大幅降低手部勞損，避免腱鞘炎風險。一鍵連續(xù)分液功能可將重復移液時間縮短 1/2 至 2/3，且適配主流品牌吸頭，無需額外采購成本。該設備能消除人工操作差異，保障實驗重復性，同時提升工作效率，為科研質量與人員體驗雙重賦能。
方案詳情：
一、實驗原理
正常血漿含完整凝血因子，用枸櫞酸鈉去除鈣離子后，凝血過程停滯；重新加入鈣離子（“復鈣”）可激活內源性凝血途徑，血漿逐漸凝固。肝素能增強抗凝血酶 Ⅲ 活性，抑制凝血因子 Ⅱa（凝血酶）、Ⅸa、Ⅹa 等關鍵因子，顯著延緩復鈣后的凝血進程。通過測定復鈣后血漿出現(xiàn)纖維蛋白凝塊的時間，可間接反映體內或體外肝素對凝血系統(tǒng)的抑制強度，進而評估肝素抗凝效果，為臨床調整肝素劑量提供依據(jù)。
二、實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC01-03-1000、MSIC90-001-10mL；
② 恒溫水浴箱 37℃±0.5℃；
③ 玻璃試管；
④ 采血針。
2、試劑和材料
① 肝素標準品；
② 供試品；
③ 氯化鈉注射液；
④ 兔血漿；
⑤ 枸椽酸鈉溶液。
三、實驗步驟
1、標準品溶液的制備：精密稱取肝素標準品適量，按標示效價加滅菌注射用水溶解使成每1mL中含100單位的溶液，分裝于適宜的容器內，4～8℃貯存。
2、標準品稀釋液的制備：試驗當日，使用Pipetty電動移液器，精密量取標準品溶液，按高、中、低劑量組（dS3、dS2、dS1）用氯化鈉注射液配制成3種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度的比值（r）應相等；調節(jié)劑量使低劑量組各管的平均凝結時間較不加肝素對照管明顯延長，一般以大于1.5倍空白血漿的凝結時間為宜。高劑量組各管的平均凝結時間，以不超過30分鐘為宜，其稀釋液一般可制成每1mL中含肝素0.5～1.5單位，r為1∶0.85左右；
3、供試品溶液與稀釋液的制備：按供試品的標示量或估計效價（AT），制成高、中、低(dT3、dT2、dT1）3種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值（r）應與標準品相等，供試品與標準品各劑量組的凝結時間應相近。
4、血漿的制備：迅速收集兔或豬血置預先放有109mmol/L枸椽酸鈉溶液的容器中，枸椽酸鈉溶液與血液容積比為1∶9，邊收集邊輕輕振搖，混勻，室溫下1500×g離心不少于15分鐘（g為重力常數(shù)）。立即吸出血漿，并分成若干份分裝于適宜容器內，低溫凍結貯存。臨用時置37℃±0.5℃水浴中融化，用兩層紗布或快速濾紙過濾，使用過程中在4～8℃放置。
5、取管徑均勻、清潔干燥的小試管若干支，使用Pipetty電動移液器，設置連續(xù)分液模式，分別加入500μL血漿，置37℃±0.5℃恒溫水浴中5～10分鐘后，依次每管加入一種濃度的標準品或供試品稀釋液400μL及100μL 1%氯化鈣溶液，每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數(shù)相等，加入1%氯化鈣溶液后，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計算時間，注意觀察并記錄各管凝結時間。
四、結果判定
1、持續(xù)觀察血漿狀態(tài)，當出現(xiàn)肉眼可見的纖維蛋白凝塊時，記錄所需時間，即為 “肝素凝血時間”。每次檢測需同時做 “正常對照血漿”，確保試劑和操作無誤差。
2、本法的可信限率（FL%）不得大于5%。
方案詳情：
一、實驗原理
正常血漿含完整凝血因子，用枸櫞酸鈉去除鈣離子后，凝血過程停滯；重新加入鈣離子（“復鈣”）可激活內源性凝血途徑，血漿逐漸凝固。肝素能增強抗凝血酶 Ⅲ 活性，抑制凝血因子 Ⅱa（凝血酶）、Ⅸa、Ⅹa 等關鍵因子，顯著延緩復鈣后的凝血進程。通過測定復鈣后血漿出現(xiàn)纖維蛋白凝塊的時間，可間接反映體內或體外肝素對凝血系統(tǒng)的抑制強度，進而評估肝素抗凝效果，為臨床調整肝素劑量提供依據(jù)。
二、實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC01-03-1000、MSIC90-001-10mL；
② 恒溫水浴箱 37℃±0.5℃；
③ 玻璃試管；
④ 采血針。
2、試劑和材料
① 肝素標準品；
② 供試品；
③ 氯化鈉注射液；
④ 兔血漿；
⑤ 枸椽酸鈉溶液。
三、實驗步驟
1、標準品溶液的制備：精密稱取肝素標準品適量，按標示效價加滅菌注射用水溶解使成每1mL中含100單位的溶液，分裝于適宜的容器內，4～8℃貯存。
2、標準品稀釋液的制備：試驗當日，使用Pipetty電動移液器，精密量取標準品溶液，按高、中、低劑量組（dS3、dS2、dS1）用氯化鈉注射液配制成3種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度的比值（r）應相等；調節(jié)劑量使低劑量組各管的平均凝結時間較不加肝素對照管明顯延長，一般以大于1.5倍空白血漿的凝結時間為宜。高劑量組各管的平均凝結時間，以不超過30分鐘為宜，其稀釋液一般可制成每1mL中含肝素0.5～1.5單位，r為1∶0.85左右；
3、供試品溶液與稀釋液的制備：按供試品的標示量或估計效價（AT），制成高、中、低(dT3、dT2、dT1）3種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值（r）應與標準品相等，供試品與標準品各劑量組的凝結時間應相近。
4、血漿的制備：迅速收集兔或豬血置預先放有109mmol/L枸椽酸鈉溶液的容器中，枸椽酸鈉溶液與血液容積比為1∶9，邊收集邊輕輕振搖，混勻，室溫下1500×g離心不少于15分鐘（g為重力常數(shù)）。立即吸出血漿，并分成若干份分裝于適宜容器內，低溫凍結貯存。臨用時置37℃±0.5℃水浴中融化，用兩層紗布或快速濾紙過濾，使用過程中在4～8℃放置。
5、取管徑均勻、清潔干燥的小試管若干支，使用Pipetty電動移液器，設置連續(xù)分液模式，分別加入500μL血漿，置37℃±0.5℃恒溫水浴中5～10分鐘后，依次每管加入一種濃度的標準品或供試品稀釋液400μL及100μL 1%氯化鈣溶液，每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數(shù)相等，加入1%氯化鈣溶液后，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計算時間，注意觀察并記錄各管凝結時間。
四、結果判定
1、持續(xù)觀察血漿狀態(tài)，當出現(xiàn)肉眼可見的纖維蛋白凝塊時，記錄所需時間，即為 “肝素凝血時間”。每次檢測需同時做 “正常對照血漿”，確保試劑和操作無誤差。
2、本法的可信限率（FL%）不得大于5%。
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