免疫缺陷小鼠六大相關(guān)問題全解析
免疫缺陷小鼠在免疫、腫瘤、移植以及轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中使用非常廣泛，許多免疫相關(guān)的研究中或多或少都有用過這些小鼠。免疫缺陷小鼠的選擇、飼養(yǎng)、繁育以及實(shí)驗(yàn)操作等問題，經(jīng)常對研究人員造成困擾。為了幫大家更好地了解免疫缺陷小鼠以應(yīng)對相關(guān)問題，杰克森實(shí)驗(yàn)室技術(shù)信息科學(xué)家孫佳偉博士為大家準(zhǔn)備了線上直播，在直播中孫博和大家分享了免疫缺陷小鼠相關(guān)的眾多信息，也回答了線上觀眾提出的很多問題。
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這次直播的響應(yīng)非常熱烈，我們收到了很多觀眾的提問，這里孫佳偉博士總結(jié)性地回答了在直播中收到的一些問題，快來看看這些問題對您的研究是否也有所幫助吧！
▲ 飼養(yǎng)相關(guān)問題
▲ 繁育相關(guān)問題
▲ 微生物感染相關(guān)問題
▲ 輻照相關(guān)問題
▲ 品系選擇相關(guān)問題
▲ 其他實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題
1、老師您好，我這邊購買了免疫缺陷NSG小鼠，請問一下在實(shí)驗(yàn)擴(kuò)繁過程中小鼠飼養(yǎng)環(huán)境需要注意什么嗎？購買什么品牌的飼料比較好呢？
3、NSG小鼠的酸水喂養(yǎng)是必須的嗎？
4、NSG小鼠可以用加氯或者高壓水嗎？
5、免疫缺陷日常如何飼養(yǎng)護(hù)理，需要注意什么？與普通鼠有什么區(qū)別？
6、飼養(yǎng)免疫缺陷小鼠有特殊的屏障環(huán)境要求嗎？必須使用IVC籠盒嗎？
7、在屏障設(shè)施里，是否所有的免疫缺陷鼠都需要在IVC籠具飼養(yǎng)？哪些需要？哪些不需要？屏障設(shè)施里開放式籠盒飼養(yǎng)免疫缺陷鼠對動物及試驗(yàn)的影響有哪些？您推薦的飼養(yǎng)方式是什么？（限屏障設(shè)施）
8、免疫缺陷小鼠異常死亡的情況，建議做哪些項(xiàng)目的檢測？
9、NSG品系本身死亡率是多少，適應(yīng)時(shí)期死亡怎么處理？
10、您所說的NSG要在合適的良好的環(huán)境下可以保持正常狀態(tài)，能否就這個(gè)合適的環(huán)境再做一些闡述，是否必須隔離包？
11、我們實(shí)驗(yàn)室需要長期飼養(yǎng)免疫缺陷鼠，日常飼養(yǎng)中有什么特別注意的地方，應(yīng)該怎么監(jiān)控其健康狀態(tài)？
12、在前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，部分飼養(yǎng)的裸鼠會出現(xiàn)長出白色體毛的現(xiàn)象，咨詢相關(guān)老師得到的回復(fù)是裸鼠的基因型出現(xiàn)問題，這種情況是否會影響腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果？
● 不同的免疫缺陷小鼠的免疫缺陷程度不同，NSG™小鼠的免疫缺陷最嚴(yán)重，但它們在嚴(yán)格的飼養(yǎng)環(huán)境和人員操作下，健康狀況良好，中期壽命大約在20個(gè)月，繁育能力正常。在JAX，所有免疫缺陷小鼠都飼養(yǎng)在最高屏障等級的SPF設(shè)施內(nèi)，排除一切機(jī)會性致病菌(Agents Monitored in JAX Mouse Rooms)，同時(shí)有一套嚴(yán)格的操作和管理流程來保障環(huán)境的穩(wěn)定和潔凈。大部分情況下，JAX小鼠的健康報(bào)告可以幫助評估您所在的設(shè)施是否能夠良好飼養(yǎng)該品系。
● 從具體的操作上看，在JAX，飼養(yǎng)免疫缺陷小鼠的籠具、飼料和飲水與其他小鼠無異，同樣是使用IVC籠盒、LabDiet® 5K52 formulation (6% fat)的飼料和鹽酸酸化到pH為2.5-3.0的酸化水。不同設(shè)施使用的飼料、飲水可能有所不同，大家可以遵從自己的設(shè)施習(xí)慣，但需要確保物料的嚴(yán)格滅菌。在JAX的設(shè)施內(nèi)，免疫缺陷小鼠極少出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。如果在設(shè)施內(nèi)出現(xiàn)小鼠的異常死亡，需要結(jié)合種群死亡率、尸檢報(bào)告、鼠房微生物檢測報(bào)告，綜合判斷死亡原因，從而采取相應(yīng)的措施加以改善。
● 對于長期飼養(yǎng)的免疫缺陷小鼠，在日常操作中，可以從以下方面監(jiān)測小鼠的健康狀態(tài)：
1、密切關(guān)注其外觀：有無皮膚異常、弓背或毛發(fā)不整，觀察實(shí)驗(yàn)傷口處有無發(fā)炎、膿腫，有無體重減輕、腹瀉等情況；
2、關(guān)注表型的變化：包括繁育數(shù)據(jù)、日常的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等；
3、定期哨兵鼠檢測：對于免疫缺陷品系而言，用常規(guī)的野生近交系可能不足以監(jiān)測，因?yàn)橛械臋C(jī)會性致病菌在免疫系統(tǒng)健全的品系上可能不會生長。所以可以用淘汰的繁育對、或者專門的重度免疫缺陷品系作為哨兵鼠。
● 關(guān)于裸鼠出現(xiàn)毛發(fā)的情況，首先需要確定基因型是否正確。如果Foxn1突變是雜合子，那么小鼠有毛發(fā)是正常的；如果Foxn1突變是純合子，小鼠一般沒有毛發(fā)，但是偶爾也會出現(xiàn)毛發(fā)。因?yàn)镕OXN1蛋白缺失會導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)“異常”的毛發(fā)生長模式，而并非完全沒有毛發(fā)[1]。如果裸鼠出現(xiàn)毛發(fā)是由于Foxn1突變雜合，那么小鼠的T細(xì)胞缺失不完全，可能導(dǎo)致對腫瘤產(chǎn)生排斥；如果確定Foxn1突變是純合，只要確定腫瘤細(xì)胞是可以在裸鼠身上成瘤的，一般情況下，輕微的毛發(fā)生長并不會對腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。
1、NSG小鼠妊娠率，產(chǎn)仔情況如何？
2、請問免疫缺陷會影響小鼠的繁殖嗎？這類小鼠如何繁育呢？
3、NSG小鼠的最佳繁殖年齡是什么？最佳使用年齡又是什么？
4、免疫缺陷鼠合籠后不懷孕可能是什么原因？
5、nude小鼠幼崽容易死亡，有的被吃掉，大鼠不給喂奶作窩，怎么處理？
6、請問NSG繁育籠的換籠頻率有什么要求？
7、繁育籠的雌雄比例是3:1嗎？
8、NSG免疫缺陷鼠生育率會隨著子代代數(shù)越多而下降嗎？生育率下降是自身原因居多還是環(huán)境影響居多？合籠小鼠為什么經(jīng)常出現(xiàn)雄鼠死亡現(xiàn)象？
9、NSG的繁殖方式是什么呢？近交系，還是隨機(jī)交配，繁育幾代會不會出現(xiàn)基因漂變？
10、如何檢測遺傳漂變的程度呢？
● 小鼠的繁育表現(xiàn)與遺傳、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作等多種因素有關(guān)，但總體來說，在嚴(yán)格且穩(wěn)定的飼養(yǎng)環(huán)境和人員操作下，免疫缺陷小鼠也是可以正常地繁育的。需要注意的是，不同的設(shè)施內(nèi)小鼠的繁育表現(xiàn)可能會有所差別，建議大家在自己的設(shè)施內(nèi)進(jìn)行持續(xù)的繁育數(shù)據(jù)收集和記錄保存，這樣在小鼠出現(xiàn)繁育問題時(shí)，可以及時(shí)地分析這些影響因素，再針對性地采取措施改善繁育表現(xiàn)。（相關(guān)閱讀：☞小鼠基礎(chǔ)知識二｜保姆級教程，幫你搞定小鼠繁育�。�
● 在JAX，NSG™小鼠的繁育性能良好，我們會在5-8周齡開始配繁，繁育籠的雌雄配比一般為1：1或者2：1，整個(gè)繁育期間雌雄小鼠始終保持同籠，以減少反復(fù)分離、合籠對雌鼠造成的潛在壓力。
● 對于長期飼養(yǎng)的品系，如果出現(xiàn)生育能力越來越差，或者是關(guān)注的表型發(fā)生了顯著變化的情況，首先需要考慮飼養(yǎng)環(huán)境是不是有所改變，如果環(huán)境本身是嚴(yán)格、穩(wěn)定的，那么就需要考慮是不是遺傳漂變的積累導(dǎo)致了這些變化。在種群繁育過程中，遺傳漂變是自發(fā)的、隨機(jī)的，并且無法避免，對遺傳漂變進(jìn)行檢測需要進(jìn)行全基因組測序，這是一項(xiàng)既耗時(shí)、成本又高的工作，因此除非是進(jìn)行遺傳漂變相關(guān)的課題研究，否則檢測遺傳漂變是沒有太大意義的。如何減少遺傳漂變的積累可能對實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的影響，最有效的措施是在種群擴(kuò)繁早期進(jìn)行胚胎或精子的大量凍存，再定期復(fù)蘇以重建種群；另一種便利的選擇是定期從可靠的供應(yīng)商引進(jìn)新的繁育對小鼠。
● JAX啟用了獲得專利的遺傳穩(wěn)定性項(xiàng)目GSP (Patented Genetic Stability Program )，來有效地保障JAX小鼠的遺傳質(zhì)量，一些重要的品系，包括NSG™小鼠，已經(jīng)納入了該計(jì)劃之中。
1、做CDX或PDX移植的時(shí)候，怎么避免移植物對小鼠造成感染？
2、NSG才2個(gè)月，自發(fā)腫瘤死亡，是微生物感染嗎？
3、PDX手術(shù)后動物表現(xiàn)拉稀，可能是什么感染呢？
4、免疫缺陷小鼠最難去除的是牛棒狀桿菌了，如何徹底根除呢？
5、利用NSG類小鼠做人源移植物異體移植時(shí)，如何避免人源移植物自身可能攜帶的微生物導(dǎo)致小鼠感染或者死亡的情況？是否有推薦的抗生素或者其他藥物給予同時(shí)注射？如何評價(jià)此類藥物可能對人源移植物造成的影響？
● 免疫缺陷小鼠由于其免疫功能受損，對病原微生物的抵抗力下降，NSG™小鼠的免疫缺陷最為嚴(yán)重，無法抵御感染，很容易受到病原微生物、機(jī)會性病原體（克雷伯產(chǎn)酸菌）、甚至它們自己的腸道菌群（腸球菌）的感染[2]。避免免疫缺陷小鼠的感染，重在預(yù)防，可以從環(huán)境、人員和實(shí)驗(yàn)操作三個(gè)方面進(jìn)行。
● 一般不建議預(yù)防性使用抗生素來喂養(yǎng)免疫缺陷小鼠，這有可能會導(dǎo)致耐藥菌的出現(xiàn)，使得之后的飼養(yǎng)繁育變得更加困難；如果動物房屏障等級較低，可以在獸醫(yī)的監(jiān)督下使用Sulfatrim，但這種藥物無法預(yù)防感染，只能抑制小鼠的感染癥狀[3]。
● 對于移植相關(guān)實(shí)驗(yàn)，除了器械和環(huán)境消毒外，還需要確保移植物是無污染的，可以在移植前對移植材料進(jìn)行MAP或者PCR檢測。如果在飼養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)了異常的疾病表型（如腹瀉、體重減輕、腫瘤）甚至死亡，可以請獸醫(yī)對死亡小鼠進(jìn)行解剖檢驗(yàn)，并且對鼠房的哨兵鼠進(jìn)行微生物檢測，以判斷是否存在微生物感染，以及是何種微生物感染。對于牛棒狀桿菌感染的預(yù)防和根除策略，可以參考視頻回放。
1、請問prkdc SCID小鼠移植同背景小鼠的脾細(xì)胞時(shí)，還需要輻照嗎？用很低劑量輻照，小鼠死亡率還是很高；直接移植死亡率也很高。
2、免疫缺陷是不是不能輻照啊？
3、人胚系干細(xì)胞移植，能不能不輻照NSG小鼠？
4、其他免疫缺陷鼠，比如rag缺陷，會對輻照敏感么？
● 由scid突變的基因Prkdc編碼一種DNA蛋白激酶，不僅在TCR/BCR基因重排中發(fā)揮重要的功能，也參與整個(gè)身體的DNA雙鏈斷裂修復(fù)。因此，所有攜帶scid突變的小鼠對損害DNA的化學(xué)或物理制劑，如癌癥化療和輻照的敏感性增加。而Rag敲除則是破壞重排信號序列（RSS）的識別與剪切，導(dǎo)致V(D)J重排通路從源頭受阻，所以Rag敲除的小鼠對輻射耐受度更高。
● 構(gòu)建免疫系統(tǒng)人源化小鼠，是免疫缺陷小鼠的一個(gè)重要的應(yīng)用領(lǐng)域，其中最常見的人源化類型是PBMC和CD34人源化。一般來說，CD34人源化小鼠的構(gòu)建，由于移植的造血干細(xì)胞需要遷移到骨髓中發(fā)育、分化，因此需要對小鼠進(jìn)行輻照，以清除鼠源造血干細(xì)胞和空出骨髓腔，幫助人造血干細(xì)胞更好地定植；而PBMC人源化小鼠的構(gòu)建，通�？梢圆贿M(jìn)行輻照。
● 不同實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)的小鼠狀態(tài)、所使用的輻照儀可能略有不同，因此在對免疫缺陷小鼠進(jìn)行一些需要輻照的實(shí)驗(yàn)時(shí)，比如CD34人源化構(gòu)建，或者對荷瘤小鼠進(jìn)行輻射治療、化療的研究時(shí)，需要考慮到小鼠對輻射以及遺傳毒性藥物的敏感性，在正式實(shí)驗(yàn)之前最好進(jìn)行最大耐受劑量的測試。
1、不同遺傳背景下的SCID壽命差異大嗎？
2、靶點(diǎn)人源化和NSG重建鼠怎么選擇？
3、如何正確選擇免疫缺陷小鼠以滿足不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />
4、如何選取合適的免疫缺陷鼠作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?br />
5、NSG-SGM3和NSG的區(qū)別在哪里呢？
6、免疫缺陷中缺失和缺陷是怎么定義的？有什么區(qū)別？是否還有相關(guān)的功能？
● 不同遺傳背景的scid突變小鼠在T、B細(xì)胞的泄露率上有所不同， C57BL/6J和BALB/cBy遺傳背景的泄露率較高，C3H/HeJ遺傳背景的泄露率降低，NOD/LtSz背景下的泄露率極低。scid突變小鼠的壽命，不僅與遺傳背景有關(guān)，也與飼養(yǎng)環(huán)境密切相關(guān)，在SPF環(huán)境中，NOD scid小鼠的中位生存期約為37周，BALB/c scid小鼠的壽命可長達(dá)一年[4]。
● 靶點(diǎn)人源化小鼠通常是在具有功能性免疫系統(tǒng)的小鼠體內(nèi)表達(dá)人的靶點(diǎn)基因，主要適用于靶向藥的臨床前效果評估，具有低成本、高效率、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)一致性等優(yōu)點(diǎn)，但是由于存在種屬差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果無法完全模擬人體內(nèi)的藥物反應(yīng)；而免疫系統(tǒng)人源化小鼠是在重度免疫缺陷小鼠體內(nèi)重建人的免疫系統(tǒng)，能夠模擬人體免疫機(jī)能，在腫瘤免疫、感染性疾病、移植相關(guān)研究、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域都有應(yīng)用，但存在操作復(fù)雜、成本高、移植等待期長等局限性。JAX持續(xù)進(jìn)行Hu-CD34 NSG™, Hu-CD34 NSG™-IL15和Hu-CD34 NSG™-SGM3人源化小鼠的構(gòu)建，基本可以達(dá)到現(xiàn)貨供應(yīng)。
● 免疫缺陷小鼠是進(jìn)行免疫學(xué)、腫瘤、感染性疾病、干細(xì)胞、移植、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等研究的有力模型，但是免疫缺陷小鼠種類繁多，它們在免疫缺陷的程度、適用的研究領(lǐng)域上有所不同。在選擇適合研究使用小鼠品系時(shí)，一方面需要充分了解每一種品系的特點(diǎn)（遺傳背景、免疫系統(tǒng)組成、壽命、局限性等），另一方面也建議結(jié)合參考文獻(xiàn)進(jìn)行綜合判斷。
1、請問移植后的外周細(xì)胞在小鼠體內(nèi)能存活多久�。�
2、PBMC移植后在NSG小鼠體內(nèi)細(xì)胞活性持續(xù)多久？
3、請問NSG小鼠到貨后適應(yīng)多久可以實(shí)驗(yàn)？
4、老師nude小鼠腫瘤移植腫瘤長大后又消退是什么原因呢？
5、使用小鼠成瘤應(yīng)該怎么選受體小鼠？這些小鼠都可以用來進(jìn)行免疫治療嗎？
● PBMC或CD34人源化小鼠的移植效率與受體鼠種類、年齡、性別、移植的細(xì)胞數(shù)目、操作、輻照強(qiáng)度、檢測時(shí)間等多種因素有關(guān)，因此很難一概而論。JAX使用6周齡雌性NSG小鼠進(jìn)行PBMC人源化的構(gòu)建，由于小鼠會較早發(fā)生GvHD（移植后4-6周），研究窗口期較短，但是人免疫細(xì)胞比例在小鼠的整個(gè)存活期內(nèi)保持穩(wěn)定。使用NSG-DKO小鼠進(jìn)行PBMC人源化的構(gòu)建，可以顯著延緩GvHD的發(fā)生。JAX進(jìn)行CD34人源化的構(gòu)建，分別是使用3周齡的雌性NSG (#005557)、NSG-IL15 (#030890)小鼠和4周齡的雌性NSG-SGM3 (#013062)小鼠，人免疫細(xì)胞經(jīng)過8-12周的發(fā)育分化后，在整個(gè)生命周期內(nèi)保持穩(wěn)定。
● 對于所有小鼠來說，都建議在收鼠后進(jìn)行至少1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)，再進(jìn)行配繁或者實(shí)驗(yàn)。裸鼠移植腫瘤生長后又消退，有可能是小鼠對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生了排斥，也有可能是腫瘤或者接種本身的原因，需要通過發(fā)生頻率和其他相關(guān)情況綜合判斷。因?yàn)槁闶蟮拿庖呷毕莩潭容^輕，只有T細(xì)胞缺失，天然免疫功能是完好的，因此在進(jìn)行腫瘤移植時(shí)是有可能發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的，這種情況下可以考慮使用免疫缺陷更為嚴(yán)重的小鼠作為受體。對于腫瘤相關(guān)研究來說，受體小鼠的選擇，取決于腫瘤細(xì)胞的類型和研究目的：
1、首先需要考慮腫瘤能不能生長。如果是一些常用的腫瘤細(xì)胞系，可以參考它之前發(fā)表過的文章信息，是使用的什么受體鼠；如果是一種新的腫瘤細(xì)胞系或者原代腫瘤細(xì)胞，第一次嘗試進(jìn)行接種的話，可以選擇NSG小鼠，研究顯示NSG小鼠對多種原代腫瘤細(xì)胞都有較高的兼容性。
2、其次是研究目的。如果要測試直接靶向腫瘤細(xì)胞的化學(xué)療法，那么只要腫瘤能夠生長的任意一種受體鼠都可以；而如果要檢測調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的免疫療法，則需要使用免疫系統(tǒng)人源化的荷瘤小鼠。
● 免疫治療，一般是通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性來進(jìn)行靶細(xì)胞殺傷的，那么就需要使用免疫系統(tǒng)人源化的小鼠。人源化小鼠在選擇上也有很多的注意事項(xiàng)，比如人源化的種類、受體鼠的種類。如果需要做初步了解，可以點(diǎn)擊鏈接觀看我們的技術(shù)講座，當(dāng)然也可以直接聯(lián)系我們的技術(shù)支持獲得建議。
參考文獻(xiàn)
[1] Cells Tissues Organs. 2001. PMID: 11275695; Acta Anat (Basel). 1990. PMID: 2288204
[2] Vet Pathol. 2011. PMID: 20817888
[3] Curr Top Microbiol Immunol. 1989. PMID: 2805792
[4] J Immunol. 2005. PMID: 15879151; J Immunol. 1995. PMID: 7995938; Nature. 1983. PMID: 6823332
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▲ 飼養(yǎng)相關(guān)問題
▲ 繁育相關(guān)問題
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免疫缺陷小鼠飼養(yǎng)相關(guān)問題
1、老師您好，我這邊購買了免疫缺陷NSG小鼠，請問一下在實(shí)驗(yàn)擴(kuò)繁過程中小鼠飼養(yǎng)環(huán)境需要注意什么嗎？購買什么品牌的飼料比較好呢？
2、重度免疫缺陷鼠的營養(yǎng)學(xué)控制和要求及消化系統(tǒng)特點(diǎn)，一般的繁殖料能否用于長期飼養(yǎng)該類型小鼠？
3、NSG小鼠的酸水喂養(yǎng)是必須的嗎？
4、NSG小鼠可以用加氯或者高壓水嗎？
5、免疫缺陷日常如何飼養(yǎng)護(hù)理，需要注意什么？與普通鼠有什么區(qū)別？
6、飼養(yǎng)免疫缺陷小鼠有特殊的屏障環(huán)境要求嗎？必須使用IVC籠盒嗎？
7、在屏障設(shè)施里，是否所有的免疫缺陷鼠都需要在IVC籠具飼養(yǎng)？哪些需要？哪些不需要？屏障設(shè)施里開放式籠盒飼養(yǎng)免疫缺陷鼠對動物及試驗(yàn)的影響有哪些？您推薦的飼養(yǎng)方式是什么？（限屏障設(shè)施）
8、免疫缺陷小鼠異常死亡的情況，建議做哪些項(xiàng)目的檢測？
9、NSG品系本身死亡率是多少，適應(yīng)時(shí)期死亡怎么處理？
10、您所說的NSG要在合適的良好的環(huán)境下可以保持正常狀態(tài)，能否就這個(gè)合適的環(huán)境再做一些闡述，是否必須隔離包？
11、我們實(shí)驗(yàn)室需要長期飼養(yǎng)免疫缺陷鼠，日常飼養(yǎng)中有什么特別注意的地方，應(yīng)該怎么監(jiān)控其健康狀態(tài)？
12、在前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，部分飼養(yǎng)的裸鼠會出現(xiàn)長出白色體毛的現(xiàn)象，咨詢相關(guān)老師得到的回復(fù)是裸鼠的基因型出現(xiàn)問題，這種情況是否會影響腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果？
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● 不同的免疫缺陷小鼠的免疫缺陷程度不同，NSG™小鼠的免疫缺陷最嚴(yán)重，但它們在嚴(yán)格的飼養(yǎng)環(huán)境和人員操作下，健康狀況良好，中期壽命大約在20個(gè)月，繁育能力正常。在JAX，所有免疫缺陷小鼠都飼養(yǎng)在最高屏障等級的SPF設(shè)施內(nèi)，排除一切機(jī)會性致病菌(Agents Monitored in JAX Mouse Rooms)，同時(shí)有一套嚴(yán)格的操作和管理流程來保障環(huán)境的穩(wěn)定和潔凈。大部分情況下，JAX小鼠的健康報(bào)告可以幫助評估您所在的設(shè)施是否能夠良好飼養(yǎng)該品系。
● 從具體的操作上看，在JAX，飼養(yǎng)免疫缺陷小鼠的籠具、飼料和飲水與其他小鼠無異，同樣是使用IVC籠盒、LabDiet® 5K52 formulation (6% fat)的飼料和鹽酸酸化到pH為2.5-3.0的酸化水。不同設(shè)施使用的飼料、飲水可能有所不同，大家可以遵從自己的設(shè)施習(xí)慣，但需要確保物料的嚴(yán)格滅菌。在JAX的設(shè)施內(nèi)，免疫缺陷小鼠極少出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。如果在設(shè)施內(nèi)出現(xiàn)小鼠的異常死亡，需要結(jié)合種群死亡率、尸檢報(bào)告、鼠房微生物檢測報(bào)告，綜合判斷死亡原因，從而采取相應(yīng)的措施加以改善。
● 對于長期飼養(yǎng)的免疫缺陷小鼠，在日常操作中，可以從以下方面監(jiān)測小鼠的健康狀態(tài)：
1、密切關(guān)注其外觀：有無皮膚異常、弓背或毛發(fā)不整，觀察實(shí)驗(yàn)傷口處有無發(fā)炎、膿腫，有無體重減輕、腹瀉等情況；
2、關(guān)注表型的變化：包括繁育數(shù)據(jù)、日常的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等；
3、定期哨兵鼠檢測：對于免疫缺陷品系而言，用常規(guī)的野生近交系可能不足以監(jiān)測，因?yàn)橛械臋C(jī)會性致病菌在免疫系統(tǒng)健全的品系上可能不會生長。所以可以用淘汰的繁育對、或者專門的重度免疫缺陷品系作為哨兵鼠。
● 關(guān)于裸鼠出現(xiàn)毛發(fā)的情況，首先需要確定基因型是否正確。如果Foxn1突變是雜合子，那么小鼠有毛發(fā)是正常的；如果Foxn1突變是純合子，小鼠一般沒有毛發(fā)，但是偶爾也會出現(xiàn)毛發(fā)。因?yàn)镕OXN1蛋白缺失會導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)“異常”的毛發(fā)生長模式，而并非完全沒有毛發(fā)[1]。如果裸鼠出現(xiàn)毛發(fā)是由于Foxn1突變雜合，那么小鼠的T細(xì)胞缺失不完全，可能導(dǎo)致對腫瘤產(chǎn)生排斥；如果確定Foxn1突變是純合，只要確定腫瘤細(xì)胞是可以在裸鼠身上成瘤的，一般情況下，輕微的毛發(fā)生長并不會對腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。
免疫缺陷小鼠繁育相關(guān)問題
1、NSG小鼠妊娠率，產(chǎn)仔情況如何？
2、請問免疫缺陷會影響小鼠的繁殖嗎？這類小鼠如何繁育呢？
3、NSG小鼠的最佳繁殖年齡是什么？最佳使用年齡又是什么？
4、免疫缺陷鼠合籠后不懷孕可能是什么原因？
5、nude小鼠幼崽容易死亡，有的被吃掉，大鼠不給喂奶作窩，怎么處理？
6、請問NSG繁育籠的換籠頻率有什么要求？
7、繁育籠的雌雄比例是3:1嗎？
8、NSG免疫缺陷鼠生育率會隨著子代代數(shù)越多而下降嗎？生育率下降是自身原因居多還是環(huán)境影響居多？合籠小鼠為什么經(jīng)常出現(xiàn)雄鼠死亡現(xiàn)象？
9、NSG的繁殖方式是什么呢？近交系，還是隨機(jī)交配，繁育幾代會不會出現(xiàn)基因漂變？
10、如何檢測遺傳漂變的程度呢？
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● 小鼠的繁育表現(xiàn)與遺傳、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作等多種因素有關(guān)，但總體來說，在嚴(yán)格且穩(wěn)定的飼養(yǎng)環(huán)境和人員操作下，免疫缺陷小鼠也是可以正常地繁育的。需要注意的是，不同的設(shè)施內(nèi)小鼠的繁育表現(xiàn)可能會有所差別，建議大家在自己的設(shè)施內(nèi)進(jìn)行持續(xù)的繁育數(shù)據(jù)收集和記錄保存，這樣在小鼠出現(xiàn)繁育問題時(shí)，可以及時(shí)地分析這些影響因素，再針對性地采取措施改善繁育表現(xiàn)。（相關(guān)閱讀：☞小鼠基礎(chǔ)知識二｜保姆級教程，幫你搞定小鼠繁育�。�
● 在JAX，NSG™小鼠的繁育性能良好，我們會在5-8周齡開始配繁，繁育籠的雌雄配比一般為1：1或者2：1，整個(gè)繁育期間雌雄小鼠始終保持同籠，以減少反復(fù)分離、合籠對雌鼠造成的潛在壓力。
● 對于長期飼養(yǎng)的品系，如果出現(xiàn)生育能力越來越差，或者是關(guān)注的表型發(fā)生了顯著變化的情況，首先需要考慮飼養(yǎng)環(huán)境是不是有所改變，如果環(huán)境本身是嚴(yán)格、穩(wěn)定的，那么就需要考慮是不是遺傳漂變的積累導(dǎo)致了這些變化。在種群繁育過程中，遺傳漂變是自發(fā)的、隨機(jī)的，并且無法避免，對遺傳漂變進(jìn)行檢測需要進(jìn)行全基因組測序，這是一項(xiàng)既耗時(shí)、成本又高的工作，因此除非是進(jìn)行遺傳漂變相關(guān)的課題研究，否則檢測遺傳漂變是沒有太大意義的。如何減少遺傳漂變的積累可能對實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的影響，最有效的措施是在種群擴(kuò)繁早期進(jìn)行胚胎或精子的大量凍存，再定期復(fù)蘇以重建種群；另一種便利的選擇是定期從可靠的供應(yīng)商引進(jìn)新的繁育對小鼠。
● JAX啟用了獲得專利的遺傳穩(wěn)定性項(xiàng)目GSP (Patented Genetic Stability Program )，來有效地保障JAX小鼠的遺傳質(zhì)量，一些重要的品系，包括NSG™小鼠，已經(jīng)納入了該計(jì)劃之中。
免疫缺陷小鼠微生物感染相關(guān)問題
1、做CDX或PDX移植的時(shí)候，怎么避免移植物對小鼠造成感染？
2、NSG才2個(gè)月，自發(fā)腫瘤死亡，是微生物感染嗎？
3、PDX手術(shù)后動物表現(xiàn)拉稀，可能是什么感染呢？
4、免疫缺陷小鼠最難去除的是牛棒狀桿菌了，如何徹底根除呢？
5、利用NSG類小鼠做人源移植物異體移植時(shí)，如何避免人源移植物自身可能攜帶的微生物導(dǎo)致小鼠感染或者死亡的情況？是否有推薦的抗生素或者其他藥物給予同時(shí)注射？如何評價(jià)此類藥物可能對人源移植物造成的影響？
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● 免疫缺陷小鼠由于其免疫功能受損，對病原微生物的抵抗力下降，NSG™小鼠的免疫缺陷最為嚴(yán)重，無法抵御感染，很容易受到病原微生物、機(jī)會性病原體（克雷伯產(chǎn)酸菌）、甚至它們自己的腸道菌群（腸球菌）的感染[2]。避免免疫缺陷小鼠的感染，重在預(yù)防，可以從環(huán)境、人員和實(shí)驗(yàn)操作三個(gè)方面進(jìn)行。
● 一般不建議預(yù)防性使用抗生素來喂養(yǎng)免疫缺陷小鼠，這有可能會導(dǎo)致耐藥菌的出現(xiàn)，使得之后的飼養(yǎng)繁育變得更加困難；如果動物房屏障等級較低，可以在獸醫(yī)的監(jiān)督下使用Sulfatrim，但這種藥物無法預(yù)防感染，只能抑制小鼠的感染癥狀[3]。
● 對于移植相關(guān)實(shí)驗(yàn)，除了器械和環(huán)境消毒外，還需要確保移植物是無污染的，可以在移植前對移植材料進(jìn)行MAP或者PCR檢測。如果在飼養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)了異常的疾病表型（如腹瀉、體重減輕、腫瘤）甚至死亡，可以請獸醫(yī)對死亡小鼠進(jìn)行解剖檢驗(yàn)，并且對鼠房的哨兵鼠進(jìn)行微生物檢測，以判斷是否存在微生物感染，以及是何種微生物感染。對于牛棒狀桿菌感染的預(yù)防和根除策略，可以參考視頻回放。
免疫缺陷小鼠輻照相關(guān)問題
1、請問prkdc SCID小鼠移植同背景小鼠的脾細(xì)胞時(shí)，還需要輻照嗎？用很低劑量輻照，小鼠死亡率還是很高；直接移植死亡率也很高。
2、免疫缺陷是不是不能輻照啊？
3、人胚系干細(xì)胞移植，能不能不輻照NSG小鼠？
4、其他免疫缺陷鼠，比如rag缺陷，會對輻照敏感么？
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● 由scid突變的基因Prkdc編碼一種DNA蛋白激酶，不僅在TCR/BCR基因重排中發(fā)揮重要的功能，也參與整個(gè)身體的DNA雙鏈斷裂修復(fù)。因此，所有攜帶scid突變的小鼠對損害DNA的化學(xué)或物理制劑，如癌癥化療和輻照的敏感性增加。而Rag敲除則是破壞重排信號序列（RSS）的識別與剪切，導(dǎo)致V(D)J重排通路從源頭受阻，所以Rag敲除的小鼠對輻射耐受度更高。
● 構(gòu)建免疫系統(tǒng)人源化小鼠，是免疫缺陷小鼠的一個(gè)重要的應(yīng)用領(lǐng)域，其中最常見的人源化類型是PBMC和CD34人源化。一般來說，CD34人源化小鼠的構(gòu)建，由于移植的造血干細(xì)胞需要遷移到骨髓中發(fā)育、分化，因此需要對小鼠進(jìn)行輻照，以清除鼠源造血干細(xì)胞和空出骨髓腔，幫助人造血干細(xì)胞更好地定植；而PBMC人源化小鼠的構(gòu)建，通�？梢圆贿M(jìn)行輻照。
● 不同實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)的小鼠狀態(tài)、所使用的輻照儀可能略有不同，因此在對免疫缺陷小鼠進(jìn)行一些需要輻照的實(shí)驗(yàn)時(shí)，比如CD34人源化構(gòu)建，或者對荷瘤小鼠進(jìn)行輻射治療、化療的研究時(shí)，需要考慮到小鼠對輻射以及遺傳毒性藥物的敏感性，在正式實(shí)驗(yàn)之前最好進(jìn)行最大耐受劑量的測試。
免疫缺陷小鼠品系選擇相關(guān)問題
1、不同遺傳背景下的SCID壽命差異大嗎？
2、靶點(diǎn)人源化和NSG重建鼠怎么選擇？
3、如何正確選擇免疫缺陷小鼠以滿足不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />
4、如何選取合適的免疫缺陷鼠作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?br />
5、NSG-SGM3和NSG的區(qū)別在哪里呢？
6、免疫缺陷中缺失和缺陷是怎么定義的？有什么區(qū)別？是否還有相關(guān)的功能？
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● 不同遺傳背景的scid突變小鼠在T、B細(xì)胞的泄露率上有所不同， C57BL/6J和BALB/cBy遺傳背景的泄露率較高，C3H/HeJ遺傳背景的泄露率降低，NOD/LtSz背景下的泄露率極低。scid突變小鼠的壽命，不僅與遺傳背景有關(guān)，也與飼養(yǎng)環(huán)境密切相關(guān)，在SPF環(huán)境中，NOD scid小鼠的中位生存期約為37周，BALB/c scid小鼠的壽命可長達(dá)一年[4]。
● 靶點(diǎn)人源化小鼠通常是在具有功能性免疫系統(tǒng)的小鼠體內(nèi)表達(dá)人的靶點(diǎn)基因，主要適用于靶向藥的臨床前效果評估，具有低成本、高效率、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)一致性等優(yōu)點(diǎn)，但是由于存在種屬差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果無法完全模擬人體內(nèi)的藥物反應(yīng)；而免疫系統(tǒng)人源化小鼠是在重度免疫缺陷小鼠體內(nèi)重建人的免疫系統(tǒng)，能夠模擬人體免疫機(jī)能，在腫瘤免疫、感染性疾病、移植相關(guān)研究、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域都有應(yīng)用，但存在操作復(fù)雜、成本高、移植等待期長等局限性。JAX持續(xù)進(jìn)行Hu-CD34 NSG™, Hu-CD34 NSG™-IL15和Hu-CD34 NSG™-SGM3人源化小鼠的構(gòu)建，基本可以達(dá)到現(xiàn)貨供應(yīng)。
● 免疫缺陷小鼠是進(jìn)行免疫學(xué)、腫瘤、感染性疾病、干細(xì)胞、移植、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等研究的有力模型，但是免疫缺陷小鼠種類繁多，它們在免疫缺陷的程度、適用的研究領(lǐng)域上有所不同。在選擇適合研究使用小鼠品系時(shí)，一方面需要充分了解每一種品系的特點(diǎn)（遺傳背景、免疫系統(tǒng)組成、壽命、局限性等），另一方面也建議結(jié)合參考文獻(xiàn)進(jìn)行綜合判斷。
免疫缺陷小鼠其他實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題
1、請問移植后的外周細(xì)胞在小鼠體內(nèi)能存活多久�。�
2、PBMC移植后在NSG小鼠體內(nèi)細(xì)胞活性持續(xù)多久？
3、請問NSG小鼠到貨后適應(yīng)多久可以實(shí)驗(yàn)？
4、老師nude小鼠腫瘤移植腫瘤長大后又消退是什么原因呢？
5、使用小鼠成瘤應(yīng)該怎么選受體小鼠？這些小鼠都可以用來進(jìn)行免疫治療嗎？
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● PBMC或CD34人源化小鼠的移植效率與受體鼠種類、年齡、性別、移植的細(xì)胞數(shù)目、操作、輻照強(qiáng)度、檢測時(shí)間等多種因素有關(guān)，因此很難一概而論。JAX使用6周齡雌性NSG小鼠進(jìn)行PBMC人源化的構(gòu)建，由于小鼠會較早發(fā)生GvHD（移植后4-6周），研究窗口期較短，但是人免疫細(xì)胞比例在小鼠的整個(gè)存活期內(nèi)保持穩(wěn)定。使用NSG-DKO小鼠進(jìn)行PBMC人源化的構(gòu)建，可以顯著延緩GvHD的發(fā)生。JAX進(jìn)行CD34人源化的構(gòu)建，分別是使用3周齡的雌性NSG (#005557)、NSG-IL15 (#030890)小鼠和4周齡的雌性NSG-SGM3 (#013062)小鼠，人免疫細(xì)胞經(jīng)過8-12周的發(fā)育分化后，在整個(gè)生命周期內(nèi)保持穩(wěn)定。
● 對于所有小鼠來說，都建議在收鼠后進(jìn)行至少1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)，再進(jìn)行配繁或者實(shí)驗(yàn)。裸鼠移植腫瘤生長后又消退，有可能是小鼠對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生了排斥，也有可能是腫瘤或者接種本身的原因，需要通過發(fā)生頻率和其他相關(guān)情況綜合判斷。因?yàn)槁闶蟮拿庖呷毕莩潭容^輕，只有T細(xì)胞缺失，天然免疫功能是完好的，因此在進(jìn)行腫瘤移植時(shí)是有可能發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的，這種情況下可以考慮使用免疫缺陷更為嚴(yán)重的小鼠作為受體。對于腫瘤相關(guān)研究來說，受體小鼠的選擇，取決于腫瘤細(xì)胞的類型和研究目的：
1、首先需要考慮腫瘤能不能生長。如果是一些常用的腫瘤細(xì)胞系，可以參考它之前發(fā)表過的文章信息，是使用的什么受體鼠；如果是一種新的腫瘤細(xì)胞系或者原代腫瘤細(xì)胞，第一次嘗試進(jìn)行接種的話，可以選擇NSG小鼠，研究顯示NSG小鼠對多種原代腫瘤細(xì)胞都有較高的兼容性。
2、其次是研究目的。如果要測試直接靶向腫瘤細(xì)胞的化學(xué)療法，那么只要腫瘤能夠生長的任意一種受體鼠都可以；而如果要檢測調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的免疫療法，則需要使用免疫系統(tǒng)人源化的荷瘤小鼠。
● 免疫治療，一般是通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性來進(jìn)行靶細(xì)胞殺傷的，那么就需要使用免疫系統(tǒng)人源化的小鼠。人源化小鼠在選擇上也有很多的注意事項(xiàng)，比如人源化的種類、受體鼠的種類。如果需要做初步了解，可以點(diǎn)擊鏈接觀看我們的技術(shù)講座，當(dāng)然也可以直接聯(lián)系我們的技術(shù)支持獲得建議。
參考文獻(xiàn)
[1] Cells Tissues Organs. 2001. PMID: 11275695; Acta Anat (Basel). 1990. PMID: 2288204
[2] Vet Pathol. 2011. PMID: 20817888
[3] Curr Top Microbiol Immunol. 1989. PMID: 2805792
[4] J Immunol. 2005. PMID: 15879151; J Immunol. 1995. PMID: 7995938; Nature. 1983. PMID: 6823332
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