改善記憶作用檢驗(yàn)方法
| 1動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 1.1跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 1.1.1原理 反應(yīng)箱底鋪有通36v電的銅柵，動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳上箱內(nèi)絕緣的平臺(tái)以避免傷害性刺激。多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)，如此訓(xùn)練5min，并記錄每鼠受到電擊的次數(shù)或叫錯(cuò)誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h或48h重作測(cè)驗(yàn)，此即記憶保持測(cè)驗(yàn)。記錄受電擊的動(dòng)物數(shù)、第一次跳下平臺(tái)的潛伏期和3min內(nèi)的錯(cuò)誤總數(shù)。停止訓(xùn)練5天后（也可以在訓(xùn)練后的一周、兩周或其它時(shí)間點(diǎn)）進(jìn)行記憶消退實(shí)驗(yàn)。 1.1.2儀器與試劑 跳臺(tái)儀：該裝置為10×10×60cm3的被動(dòng)回避條件反射箱，用黑色塑料板分隔成5間。底面鋪以銅柵，間距為0.5cm，可以通電，電壓強(qiáng)度由一變壓器控制。每間左后角置一高和直徑均為4.5cm的絕緣平臺(tái)。 試劑：樟柳堿、環(huán)已酰亞胺、乙醇。 1.1.3實(shí)驗(yàn)方法 1.1.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 斷乳鼠，體重10g左右；或成年鼠，體重18-22g用于改善老年人記憶的產(chǎn)品必須采用成年鼠。雌雄均可，單一性別不少于10只（最后有效數(shù)據(jù)）。推薦使用近交系小鼠。 1.1.3.2劑量設(shè)計(jì)和分組 共設(shè)高、中、低、對(duì)照四個(gè)組，根據(jù)推薦的人體每日每公斤體重?cái)z入量，擴(kuò)大10倍作為其中一個(gè)劑量組，根據(jù)受試樣品的具體情況另設(shè)兩個(gè)劑量組。經(jīng)口給樣。原則上連續(xù)給樣30天，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行設(shè)定給樣期限。 1.1.3.3實(shí)驗(yàn)方法及步驟 1.1.3.3.1受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響 末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。將動(dòng)物放入反應(yīng)箱內(nèi)（臺(tái)上、臺(tái)下）適應(yīng)環(huán)境3min，然后將動(dòng)物放置反應(yīng)箱內(nèi)的銅柵上，立即通以36v的交流電。動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)（絕緣體），以躲避傷害性刺激。多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺(tái)上。訓(xùn)練一次后，將動(dòng)物放在反應(yīng)箱內(nèi)的平臺(tái)上，記錄5min內(nèi)各鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)和第一次跳下平臺(tái)的潛伏期，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)（記憶獲得）。24或48h后進(jìn)行重測(cè)驗(yàn)，將小鼠放在平臺(tái)上，記錄各鼠第一次跳下平臺(tái)的潛伏期、各鼠3min內(nèi)電擊次數(shù)和受電擊的動(dòng)物數(shù)總數(shù)，同時(shí)計(jì)算出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動(dòng)物的百分率（受電擊的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分率）（記憶鞏固）。停止訓(xùn)練5天后（包括第5天）可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)（記憶再現(xiàn)，方法同重測(cè)驗(yàn)）。 1.1.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響 1.1.3.3.2.1模型制造 記憶獲得障礙模型制造：訓(xùn)練前10min腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿5mg/kg體重； 記憶鞏固障礙模型制造：訓(xùn)練前10min腹腔注射環(huán)已酰亞胺120mg/kg體重； 記憶再現(xiàn)障礙模型制造：重測(cè)驗(yàn)前30min灌胃30%的乙醇0.1mL/10g體重； 1.1.3.3.2.2記憶測(cè)試的操作方法：同1.1.3.3.1 1.1.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定 潛伏期結(jié)果為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 錯(cuò)誤次數(shù)和3min內(nèi)跳下平臺(tái)的動(dòng)物均為記數(shù)資料，可用X2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。 若受試樣品組與對(duì)照組比較，潛伏期明顯延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)或跳下平臺(tái)的動(dòng)物明顯少于對(duì)照組，差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中，任一階段（記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)）的任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。 1.1.5注意事項(xiàng) 1.1.5.1動(dòng)物在24h內(nèi)有其活動(dòng)周期，不同時(shí)相處于不同的覺醒水平，故每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇同一時(shí)間（上午8-12點(diǎn)或下午1-4點(diǎn)），前后2天的實(shí)驗(yàn)要在同一時(shí)間內(nèi)完成。 1.1.5.2實(shí)驗(yàn)應(yīng)在隔音，光強(qiáng)度和溫、濕度適宜且保持一致的行為實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。 1.1.5.3推薦使用純系動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)前數(shù)天將動(dòng)物移至實(shí)驗(yàn)室以適應(yīng)周圍環(huán)境。 1.1.5.4實(shí)驗(yàn)者必須每天與動(dòng)物接觸，如：喂水、喂食和撫摸動(dòng)物。 1.1.5.5減少非特異性干擾，如情緒、注意、動(dòng)機(jī)、覺醒、運(yùn)動(dòng)活動(dòng)水平、應(yīng)激和內(nèi)分泌等因素。 1.1.5.6考慮動(dòng)物種屬差異。 1.2避暗法 1.2.1原理 利用小鼠嗜暗的習(xí)性設(shè)計(jì)一個(gè)裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，并與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。小鼠進(jìn)入暗室即受到電擊，計(jì)時(shí)自動(dòng)停止。 1.2.2儀器和試劑 避暗儀：該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm，其上方約20cm處懸一40w鎢燈絲。暗室較大，大小17cm×4.5cm，兩室之間有一直徑約3cm的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強(qiáng)度可在一旋鈕上任意選擇。一般40v電壓。暗室與一計(jì)時(shí)器相連，計(jì)時(shí)器可自動(dòng)記錄潛伏期的時(shí)間。 試劑：樟柳堿、環(huán)已酰亞胺、乙醇。 1.2.3實(shí)驗(yàn)方法 1.2.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 同1.1.3.1 1.2.3.2劑量設(shè)計(jì)和分組 同1.1.3.2 1.2.3.3實(shí)驗(yàn)方法及步驟 1.2.3.3.1受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響 末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面部背向洞口放入明室，同時(shí)啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。動(dòng)物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計(jì)時(shí)器自動(dòng)停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間，此即潛伏期，訓(xùn)練5min，并記錄5min內(nèi)的電擊次數(shù)（記憶獲得）。24h或48h后重作測(cè)驗(yàn)，記錄每只動(dòng)物進(jìn)入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)，并計(jì)算5min內(nèi)進(jìn)入暗室（錯(cuò)誤反應(yīng)）的動(dòng)物百分率（記憶鞏固）。停止訓(xùn)練5天后可以在不同的時(shí)間進(jìn)行一次或多次記憶消退實(shí)驗(yàn)（記憶再現(xiàn)）。 1.2.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響： 1.2.3.3.2.1模型制造：方法同1.1.3.3.2.1 1.2.3.3.2.2操作方法：同1.2.3.3.1 1.2.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定 潛伏期時(shí)間為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 5min內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù)和5min內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)均為計(jì)數(shù)資料，可用X2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。 若受試樣品組小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，5min內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)或5min內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)少于對(duì)照組，且差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中任一階段（記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)）的任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。 1.2.5注意事項(xiàng)：同1.1.5 1.3穿梭箱實(shí)驗(yàn)（雙向回避實(shí)驗(yàn)） 1.3.1原理：條件反射 1.3.2儀器與試劑 儀器：大鼠穿梭箱。該裝置由實(shí)驗(yàn)箱和自動(dòng)記錄打印裝置組成。實(shí)驗(yàn)箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不銹鋼棒，箱底中央部有一高1.2cm擋板，將箱底部分隔成左右兩則。實(shí)驗(yàn)箱頂部有淘汰和蜂鳴音控制器，自動(dòng)記錄打印裝置可連續(xù)自動(dòng)記錄動(dòng)物對(duì)電刺激（燈光或/和蜂鳴器）的反應(yīng)和潛伏期，并將結(jié)果打印出來。 試劑：樟柳堿，環(huán)已酰亞胺，乙醇 1.3.3實(shí)驗(yàn)方法 1.3.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar或SD大鼠，斷乳鼠或成年鼠，雄、雌均可。 1.3.3.2劑量設(shè)計(jì)和分組 同1.1.3.2 1.3.3.3實(shí)驗(yàn)方法及步驟 1.3.3.3.1受試樣品對(duì)正常大鼠條件反射建立的影響 將大鼠放入箱內(nèi)任何一側(cè)，20s后開始呈現(xiàn)燈光或蜂鳴音，持續(xù)20s，后10s內(nèi)同時(shí)給以電刺激（100v，0.2mA，50Hz，AC）。大鼠在遭電擊后即逃避，必須跑到對(duì)側(cè)頂端，擋住光電管后才可中斷電擊，此為被動(dòng)回避反應(yīng)，在每次電擊前給予條件刺激，反復(fù)強(qiáng)化后，大鼠在接受條件刺激后即跳向?qū)?cè)并擋住光電管而逃避電擊，此為主動(dòng)回避反應(yīng)，每隔一天訓(xùn)練一回，每回50次，連續(xù)訓(xùn)練4-5回后，動(dòng)物的主動(dòng)回避反應(yīng)率可達(dá)80-90%以上。根據(jù)打印結(jié)果分析如下指標(biāo)：動(dòng)物反應(yīng)次數(shù)，動(dòng)物主動(dòng)回避時(shí)間，動(dòng)物被動(dòng)回避時(shí)間，動(dòng)物主動(dòng)回避率。停止訓(xùn)練5-50天內(nèi)，分2-3次測(cè)定其記憶消退情況。 1.3.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型大鼠條件反射建立的影響 1.3.3.3.2.1模型制造：同1.1.3.3.2.1 1.3.3.3.2.2操作方法：同1.3.3.3.1 1.3.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定 動(dòng)物主動(dòng)回避時(shí)間和被動(dòng)回避時(shí)間為計(jì)量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 若實(shí)驗(yàn)組主動(dòng)和/或被動(dòng)回避時(shí)間明顯短于對(duì)照組，差異有顯著性，可判定為該指標(biāo)陽性。 1.3.5注意事項(xiàng)：同1.1.5。 1.4水迷宮實(shí)驗(yàn) 1.4.1原理 動(dòng)物都有一種“探索”和“更替”傾向，當(dāng)離開一個(gè)臂時(shí)，總是跑向“久”未跑過的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而尋找能爬出水面的階梯，訓(xùn)練后，小鼠能記住找到階梯的路線。 1.4.2儀器與試劑 水迷宮自動(dòng)記錄儀。該儀器是由迷宮游泳箱和自動(dòng)記錄儀兩部分組成。迷宮游泳箱由聚乙烯塑料制成，長(zhǎng)100cm、寬100cm、高30cm；內(nèi)徑長(zhǎng)90cm、寬90cm、高30cm，永道寬12cm，泳道走向固定。見附圖。 1.4.3實(shí)驗(yàn)方法 1.4.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 推薦使用純系小鼠，斷乳鼠或成年鼠，雌雄均可。 1.4.3.2劑量設(shè)置、給樣途徑和期限 均同1.1.3.2 1.4.3.3實(shí)驗(yàn)方法 1.4.3.3.1受試樣品對(duì)正常小鼠記憶的影響連續(xù)給樣30天，末次給樣次日開始訓(xùn)練。訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣，每天一次。迷宮泳道水深9cm，水溫約20℃（≥15℃）。將小鼠訓(xùn)練時(shí)間限定為120s，在120s內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠均記為120s。 第一次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，使其自動(dòng)爬上3次。以后每次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，背朝樓梯，使其自動(dòng)爬上1次。實(shí)驗(yàn)分階段進(jìn)行，視動(dòng)物學(xué)習(xí)成績(jī)逐步加長(zhǎng)路程。第一次訓(xùn)練時(shí)用一擋板在A處擋死，從A處開始訓(xùn)練，記錄從A點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間。第二次訓(xùn)練加長(zhǎng)路程，從B處開始，此路程約訓(xùn)練3次，至動(dòng)物數(shù)80%以上在2min內(nèi)達(dá)到終點(diǎn)后再延長(zhǎng)路程，分別記錄各鼠每次從B點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)（進(jìn)入任何一個(gè)盲端一次均算一次錯(cuò)誤）。末次測(cè)試從起點(diǎn)進(jìn)行，將小鼠放在起點(diǎn)，記錄從起點(diǎn)到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間和發(fā)生錯(cuò)誤的次數(shù)。每次訓(xùn)練時(shí)，對(duì)2min內(nèi)未到達(dá)終點(diǎn)的小鼠，應(yīng)引導(dǎo)其到達(dá)終點(diǎn)，從終點(diǎn)的樓梯上來，達(dá)到訓(xùn)練的目的。每次訓(xùn)練或測(cè)驗(yàn)時(shí)均將頭朝超始點(diǎn)。最后計(jì)算各組動(dòng)物5次訓(xùn)練和測(cè)試的總錯(cuò)誤次數(shù)，到達(dá)終點(diǎn)的總時(shí)間及2min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的總動(dòng)物數(shù)（百分率），（包括了記憶獲得和記憶鞏固兩個(gè)階段的成績(jī)）。停止訓(xùn)練5天后可在不同的時(shí)間從起點(diǎn)進(jìn)行消退實(shí)驗(yàn)（記憶再現(xiàn)）。 1.4.3.3.2受試樣品對(duì)記憶障礙模型小鼠的影響 1.4.3.3.2.1模型制造方法：同1.1.3.3.2.1 1.4.3.3.2.2操作方法：同1.4.3.3.1 1.4.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定 到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間屬計(jì)量資料，可采方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值 錯(cuò)誤次數(shù)和到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)（百分率）兩指標(biāo)為計(jì)數(shù)資料，可用X2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改用確切概率法。 試驗(yàn)組與對(duì)照組比，試驗(yàn)組到達(dá)終點(diǎn)所用的時(shí)間或到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于對(duì)照組，或2min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)明顯多于對(duì)照組，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性。其中記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)任意階段的任一項(xiàng)指標(biāo)為陽性，可判為該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)陽性。 1.4.5注意事項(xiàng) 1.4.5.1訓(xùn)練時(shí)在目標(biāo)區(qū)（終點(diǎn)）停留的時(shí)間不能太短，否則推動(dòng)強(qiáng)化效果。 1.4.5.2每天訓(xùn)練結(jié)束后，要對(duì)實(shí)驗(yàn)箱進(jìn)行清洗，以清除動(dòng)物留下的氣味。 1.4.5.3實(shí)驗(yàn)前可對(duì)動(dòng)物進(jìn)行初篩，經(jīng)訓(xùn)練后，2min內(nèi)仍不能游至終點(diǎn)者淘汰。 1.4.5.4其余同1.1.5。 記憶測(cè)試指標(biāo)一覽表 測(cè)試項(xiàng)目 評(píng)價(jià)指標(biāo) 所用儀器 被動(dòng)回避跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 被動(dòng)回避時(shí)間、錯(cuò)誤次數(shù)和動(dòng)物出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)百分率 跳臺(tái)儀 避暗實(shí)驗(yàn) 同上 避暗儀 主動(dòng)回避 單向回避實(shí)驗(yàn) 達(dá)標(biāo)所需的訓(xùn)練次數(shù) 穿梭箱 雙向回避實(shí)驗(yàn) 回避時(shí)間和回避率 穿梭箱 迷宮試水迷宮實(shí)驗(yàn) 到達(dá)安全臺(tái)的時(shí)間和達(dá)標(biāo)所需的訓(xùn)練次數(shù)、動(dòng)物出現(xiàn)錯(cuò)誤反應(yīng)的動(dòng)物百分率 水迷檢驗(yàn) 1.5結(jié)果判定 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、水迷宮實(shí)驗(yàn)四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。且重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（所重復(fù)的同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)兩次結(jié)果均為陽性），可以判定為該受試樣品改善記憶作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)陽性。 2人體試食試驗(yàn) 2.1改善記憶的保健食品人體試食試驗(yàn)的一般原則 2.1.1受試樣品進(jìn)行人體試食試驗(yàn)，受試樣品必須有其來源、組成、加工工藝和衛(wèi)生條件的詳細(xì)說明，必須先經(jīng)毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)，證明安全無毒，也不存在任何潛在的危險(xiǎn)因素；經(jīng)動(dòng)物功效實(shí)驗(yàn)已證明有效，或者雖然動(dòng)物實(shí)驗(yàn)無效，但有大量背景資料證明確有改善人體記憶作用，在此基礎(chǔ)上，才能進(jìn)行人體試食試驗(yàn)。 2.1.2受試者：參加人體試食試驗(yàn)的受試者應(yīng)本著自覺自愿的原則。 2.1.3主試者：本試驗(yàn)的主試人員應(yīng)以保障受試者的健康為前提，對(duì)受試者高度負(fù)責(zé)。主試者應(yīng)與受試者一起服用受試樣品。主試人員必須經(jīng)過專門的培訓(xùn)，取得結(jié)業(yè)證書后方可進(jìn)行該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。 2.2選擇受試者的原則 2.2.1從比較集中、各方面影響因素大致相同的群體中挑選受試者，比如學(xué)校、部隊(duì)或其它群體。參加人體試食試驗(yàn)的受試者應(yīng)本著自覺自愿的原則。 2.2.2文化程度基本一致（均選有文化的人或均選無文化的人） 2.2.3屬同一年齡組，如不在同一年齡組，則應(yīng)對(duì)量表分進(jìn)行校正 2.2.4未接受過類似測(cè)試 2.2.5 6個(gè)月以內(nèi)未服用過與改善記憶有關(guān)的藥品或保健食品 2.3受試樣品的劑量和使用方法：按照生產(chǎn)廠家推薦的服用量和服用方法服用。 2.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)和分組 2.4.1試驗(yàn)原則：對(duì)照、雙盲、隨機(jī) 2.4.2對(duì)照：記憶測(cè)試是一種心理測(cè)試，易受遷移學(xué)習(xí)和心理暗示的影響，第二次測(cè)驗(yàn)的記憶商一般比第一次高，有時(shí)對(duì)照組前后兩后測(cè)試的記憶商差異有顯著性。因此，不能僅以服樣前后自身比較的結(jié)果下結(jié)論，必須設(shè)置平行對(duì)照。 2.4.3雙盲：對(duì)照組必須服用安慰劑（不含有效成份，但其劑型、色澤、外觀、口感、包裝等均受試樣品相同），以消除心理暗示的影響；主試者在施測(cè)時(shí)不知道誰服樣品，誰服安慰劑，以消除主試者主觀偏向的影響，保證測(cè)試結(jié)果客觀可靠。 2.4.4同一受試者前后兩次測(cè)試由同一主試者進(jìn)行， 2.4.5施測(cè)順序一般是先聽覺測(cè)驗(yàn)后視覺測(cè)驗(yàn)。具體測(cè)驗(yàn)順序是：（1）指向記憶，（2）聯(lián)想學(xué)習(xí)，（3）無意義圖形再認(rèn)。（4）圖象自由回憶。（5）人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶。 2.4.6分組方法：服樣前對(duì)受試者進(jìn)行第一次記憶商測(cè)試后，然后按記憶商隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如文化水平、年齡等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間可比性。每組受試者不少于50例。 2.4.7受試樣品的劑量和使用方法：試食組按樣品推薦劑量和方法服用受試樣品，對(duì)照組服用安慰劑。觀察時(shí)間不少于30天，必要時(shí)可以延長(zhǎng)。 2.5觀察指標(biāo) 各項(xiàng)指標(biāo)于試驗(yàn)開始及結(jié)束時(shí)各檢測(cè)一次。 2.5.1安全性指標(biāo) 2.5.1.1一般狀況 包括精神、睡眠、飲食、大小便、心率等（兒童只要求進(jìn)行心肺聽診、肝脾觸診等一般體格檢查） 2.5.1.2血、尿常規(guī)檢查 2.5.1.3肝、腎功能檢查（成人受試者測(cè)定此項(xiàng)） 2.5.1.4胸透、心電圖、腹部B超檢查（成人受試者測(cè)定此項(xiàng)且僅試驗(yàn)前檢查一次） 2.5.2功效指標(biāo)：使用臨床記憶量表。用測(cè)試后的各分測(cè)驗(yàn)原始分查量表分，各分測(cè)驗(yàn)量表分相加得總量表分，用總表分查記憶商。 2.5.2.1指向記憶量表分 2.5.2.2聯(lián)想學(xué)習(xí)量表分 2.5.2.3圖象自由回憶量表分 2.5.2.4無意義圖形再認(rèn)量表分 2.5.2.5人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶量表分 2.5.2.6記憶商 2.6試驗(yàn)材料 2.6.1錄有指向記憶和聯(lián)想學(xué)習(xí)的指導(dǎo)語和刺激詞的磁帶。 2.6.2圖片材料（分甲、乙兩套） 2.6.2.1無意義圖形再認(rèn) 備第一次呈現(xiàn)用目標(biāo)刺激圖片20張，備第二次再認(rèn)時(shí)呈現(xiàn)用目標(biāo)刺激和混入刺激圖片各20張，共40張，合計(jì)60張圖片。 2.6.2.2圖象自由回憶物象圖片 兩組各15張，共30張。 2.6.2.3人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶 備第一次呈現(xiàn)用的黑白勾畫人面像6張，備回憶時(shí)呈現(xiàn)的人面像6張，兩者內(nèi)容相同，順序不同，共計(jì)12張，每張人像圖片背面標(biāo)有該人像的姓氏、職業(yè)、愛好、特點(diǎn)。 2.6.3錄音機(jī)、秒表、記錄紙。 2.7測(cè)試內(nèi)容及方法：統(tǒng)一使用臨床記憶量表，具體方法參見臨床記憶量表。 臨床記憶量表有五項(xiàng)測(cè)試內(nèi)容： 指向記憶 聯(lián)想學(xué)習(xí) 圖象自由回憶 無意義圖形再認(rèn) 人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶 臨床記憶量表的特點(diǎn)是備有有文化和無文化兩個(gè)部分的正常值，便于檢測(cè)無文化者。臨床記憶量表共包括5個(gè)分量表。各分測(cè)驗(yàn)的測(cè)試順序（如圖象自由回憶的圖片呈現(xiàn)順序）在所有受試者中應(yīng)一致。 2.7.1指向記憶：包括兩組內(nèi)容，每組24個(gè)詞，每詞由2-3個(gè)字組成，以1秒的速度讀出，兩個(gè)詞之間間隔2s，其中有12個(gè)詞屬于同一類別，即為指向詞：另12個(gè)混在其中相類似的詞，為非指向詞。（例如甲套第一組詞中有12個(gè)詞屬于水果類，混雜的詞有粽子、年糕、冰糖12個(gè)食品類詞：第二組詞中有12個(gè)詞屬于動(dòng)物類，混雜的詞有皮膚、尾巴、眼睛、耳朵等身體器官類詞12個(gè)。）要求受試者記憶指定的同類別詞（如水果）。24個(gè)詞隨機(jī)排列，用錄音機(jī)放送，每組詞全部放送完畢后，要求受試者者立即回憶，說出要求記憶的一類詞（不一定要按放送的順序回憶）。主試者按受試者者回憶的順序，將所說出的內(nèi)容在記錄紙上按順序用數(shù)字記在相應(yīng)詞下面的方格內(nèi)，并記錄總的反應(yīng)時(shí)間，如果受試者說出的不是放送的詞內(nèi)容（稱為“添加性錯(cuò)誤”），則寫在記錄紙上該組詞后面空格內(nèi)。如果說的是混雜進(jìn)去的不需記憶的詞，則記在下面非指向欄內(nèi)相應(yīng)詞下，亦算錯(cuò)誤。反應(yīng)時(shí)間從主試者說：“現(xiàn)在請(qǐng)您回答”算起，直到回憶結(jié)束。允許回憶時(shí)間不超過2min。 當(dāng)?shù)谝唤M詞受試者回憶結(jié)束后，間隔5s，再重復(fù)一遍指導(dǎo)語，然后放送第二組詞，方法同前。在第二組詞回憶完畢后，詢問受試者“除了要求您記的動(dòng)物（或穿戴）這類詞以外，您還記得別的詞嗎？”這就是“非指向記憶”結(jié)果，可記錄在表內(nèi)混雜詞下面的方格內(nèi)。這里要注意在第一組詞回憶完畢時(shí)，不要做這樣的詢問，否則將引起受試者在識(shí)記第二組詞時(shí)把注意力指向識(shí)記包括指向和非指向在內(nèi)的所有詞，那就不符合這項(xiàng)測(cè)驗(yàn)的原意了。最后詢問受試者“用什么方法記憶”。 指導(dǎo)語：“我念一些詞，您要注意聽，里面有的是水果名字（或動(dòng)物名字、蔬菜名字、穿戴的東西），有的不是，要求您記住水果名字（或動(dòng)物名字—天上飛的、地下跑的、爬的，大的、小的都算；蔬菜名字、穿戴的東西）。我念完以后，您要把聽過的水果（或動(dòng)物、蔬菜、穿戴）的名字說出來，不一定按照我念的順序說，記得什么就先說什么，聽明白了嗎？現(xiàn)在注意聽”。如果指導(dǎo)語沒聽明白，可以重復(fù)口述一遍�？陬^重復(fù)時(shí)，指導(dǎo)語不得任意更改，例如，“要求記住水果（或其它）名字”不得改成“只要記住水果名字或光記（或就記）水果名字”，或者甚至加上“不記其它的東西”就更不對(duì)了，這會(huì)導(dǎo)致沒的結(jié)果，是不允許的。計(jì)分：以兩組指向記憶刺激詞的正確回憶數(shù)之和來計(jì)分，并記錄添加性錯(cuò)誤的詞或其它錯(cuò)誤備分析研究用。（滿分24分）。 甲套指向記憶詞呈現(xiàn)順序?yàn)椋?span id="cqmmsq0s2" class=Apple-converted-space> 1．橘子 香蕉 粽子 石榴 桃子 粉條 年糕 西瓜 葡萄 冰糖 鴨蛋 柿子 茶葉 豆腐 蘋果 白酒 牛奶 李子 餅干 杏 花椒 香瓜 木耳 鴨梨 2．烏鴉 公雞 耳朵 蜜蜂 兔子 指甲 皮膚 狐貍 麻雀 眼睛 肩膀 青蛙 牙齒 肝臟 蒼蠅 翅膀 心臟 老虎 頭發(fā) 猴子 尾巴 蜻蜓 鼻子 螞蟻 乙套指向記憶詞呈現(xiàn)順序?yàn)椋?span id="cqmmsq0s2" class=Apple-converted-space> 1．蘿卜 茄子 大麥 韭菜 黃瓜 玉米 松樹 扁豆 冬瓜 梅花 稻子 辣椒 荷花 楊樹 白菜 桃花 棉花 菠菜 芝麻 西紅柿 菊花 芹菜 柳樹 豆芽菜 2．圍巾 球鞋 牙膏 裙子 手套 筷子 板凳 短褲 雨衣 鐵鍋 剪刀 大衣 鬧鐘 電燈 襪子 火柴 縫紉機(jī) 皮襖 刷子 襯衫 扁擔(dān) 毛褲 掃帚 草帽 2.7.2聯(lián)想學(xué)習(xí)：每套有12對(duì)2個(gè)字組成的詞構(gòu)成量表，其中容易的（成對(duì)聯(lián)想詞間有邏輯聯(lián)系）與困難的（成對(duì)聯(lián)想詞間無邏輯聯(lián)系）成對(duì)詞各6對(duì)，容易聯(lián)想包括反義詞（如困難—容易）、同類詞（如太陽—月亮）和從屬詞（如牲口—牛馬）各兩對(duì)；困難聯(lián)想包括具體—具體（西瓜—衣服）、抽象—具體（如勇敢—電燈）和抽象—抽象（如光明—服從）成對(duì)詞各兩對(duì)。用以檢查對(duì)不同成對(duì)詞的記憶情況。以每對(duì)詞3s的速度讀出，兩對(duì)詞之間間隔2s，12對(duì)詞隨機(jī)排列，用錄音機(jī)放送，共放送三遍，即受試者有三次學(xué)習(xí)機(jī)會(huì)，但每遍詞放送的順序不同。每放送一遍后，主試者念每對(duì)詞的前面一個(gè)詞（即刺激詞），要求受試者答出后面一個(gè)詞來（即反應(yīng)詞），主試者將結(jié)果記錄在相應(yīng)格內(nèi)。如果回答正確，打“√”號(hào)，如果錯(cuò)誤，則記錄錯(cuò)答之詞，沒答出來，則以“0”表示。每對(duì)詞允許回憶時(shí)間5s。最后詢問受試者“用什么方法記憶”。 指導(dǎo)語：“我給您念12對(duì)詞，您要注意聽，要求您記住哪兩個(gè)詞是連在一起的一對(duì)，比如我念‘桌子—車馬’，表示‘桌子’和‘馬車’是聯(lián)在一起的一對(duì)詞。我念完12對(duì)詞以后，就念每對(duì)詞中的前面一個(gè)詞，要求您答出和它一對(duì)的后面一個(gè)詞來，比如我念‘桌子’，您就回答（停頓一下，讓受試者回憶）‘馬車’聽明白了嗎？”如果沒聽明白，可以重復(fù)口述一遍。 計(jì)分：分為容易、困難以及兩者之和三種分?jǐn)?shù)。每遍放送后，對(duì)容易的詞每答對(duì)一個(gè)計(jì)0.5分，6對(duì)共3分；困難的詞每答對(duì)一個(gè)計(jì)1分，6對(duì)共6分，6對(duì)容易和6對(duì)困難詞之和為9分，三遍的滿分為27分。 2.7.3圖象自由回憶：包括2組畫有物體的圖片材料，每組15張，所畫的物體都是人們常見的、熟悉的和易于辨認(rèn)的東西，如日用品、交通工具等。每張圖片呈現(xiàn)4s、圖片間間隔2s，圖片順序隨機(jī)排列。15張圖片呈現(xiàn)完畢后，要求受試者立即回憶說出所記得的圖片內(nèi)容（不一定要按刺激呈現(xiàn)的順序回憶）。主試者按受試者回憶的順序，將所記得的圖片在記錄紙上按順序用數(shù)字記在相應(yīng)圖片名稱下的方格內(nèi)，并記錄總的反應(yīng)時(shí)間。如果受試者說出的是圖片中沒有的內(nèi)容（稱為添加性錯(cuò)誤），則寫在記錄紙上該圖片系列后面的空格內(nèi)。反應(yīng)時(shí)從主試者“現(xiàn)在請(qǐng)您回答”算起，直到回憶結(jié)束。允許回憶時(shí)間不超過2min。當(dāng)?shù)谝唤M圖片受試者回憶結(jié)束后，間隔5s，再重復(fù)一遍指導(dǎo)語，然后呈現(xiàn)第二組圖片，方法同前。最后詢問受試者“用什么方法記憶”。 口述指導(dǎo)語：“我給您看一些圖片，您仔細(xì)看，并記住它們是什么，有看不表的可以問，等全部看完后，立即說出您看到的是些什么東西，不一定按照我念的順序說，記得什么就先說什么，聽明白了嗎？現(xiàn)在注意看”如果沒聽明白，可以重復(fù)口述一遍，直到受試者理解為止。 計(jì)分 以兩組圖片的正確回憶數(shù)之和計(jì)分（滿分30分），并記錄添加性錯(cuò)誤。 2.7.4無意義圖形再認(rèn)：包括20張目標(biāo)刺激圖片，40張?jiān)僬J(rèn)刺激圖片（其中與呈現(xiàn)圖片相同目標(biāo)刺激圖片20張，相似混同刺激圖片20張）。目標(biāo)刺激為5種形式的無意義圖形，即曲線封閉、直線封閉、曲線直線、曲線不封閉、直線不封閉。每種各4張，共20張。 測(cè)驗(yàn)時(shí)，先給受試者分別呈現(xiàn)20張目標(biāo)刺激圖片，每張呈現(xiàn)3s，相隔3s,要求受試者記住這些目標(biāo)刺激。然后，隨機(jī)呈現(xiàn)40張?jiān)僬J(rèn)刺激圖片（包括目標(biāo)刺激圖片和混同刺激圖片），圖片隨機(jī)排列，要求受試者將與目標(biāo)刺激圖片完全相同的圖片辨認(rèn)出來，即每張圖片呈現(xiàn)時(shí)，回答“看過”或“沒看過”，每張?jiān)试S回憶時(shí)間為5s。如果對(duì)目標(biāo)刺激回答“看過”，則按圖片中央Z號(hào)（從1--20）在記錄紙目標(biāo)刺激一項(xiàng)相應(yīng)格內(nèi)打“√”號(hào)，如答“沒看過”，則打“×”號(hào)。如果對(duì)混入刺激回答“沒看過”，則按圖片中央Z號(hào)（從21--40）在記錄紙混入刺激一項(xiàng)相應(yīng)格內(nèi)打“√”號(hào)，如答“沒看過”，則打“×”號(hào)。最后詢問受試者“用什么方法記憶”。 口述指導(dǎo)語：“我給您看一些由簡(jiǎn)單的曲線和直線構(gòu)成的圖形，看的時(shí)間比較短，您要仔細(xì)看，并記住它們的特點(diǎn)，有看不表的可以問，等看完后，我再給您看另一些圖片，其中有您看過的，也有您沒有看過的，它們都很相似，要求您認(rèn)出哪些是看過的，哪些是沒看過的，聽明白了嗎？現(xiàn)在注意看”。如果沒聽明白，可以重復(fù)口述一遍，直到受試者理解為止。 無意義圖形背面的數(shù)字表示 計(jì)分 再認(rèn)分=（正確再認(rèn)目標(biāo)刺激—錯(cuò)誤混入刺激數(shù)）×2（滿分40分），即再認(rèn)分=（擊中—虛報(bào)）×2 對(duì)目標(biāo)刺激回答“看過”，稱為“擊中”，對(duì)沒看過的混入刺激也回答“看過”，稱為“虛報(bào)”。 2.7.5人像特點(diǎn)聯(lián)系回憶：包括6張黑白人面像圖片。按隨機(jī)順序排列每張人像分別呈現(xiàn)9s，間隔3s，在呈現(xiàn)的同時(shí)，告訴被測(cè)驗(yàn)者每張圖片上的人像的姓名、職業(yè)和愛好等特點(diǎn)，重復(fù)2遍，并要求被測(cè)驗(yàn)者記住人像及特點(diǎn)之間的聯(lián)系。然后再以另一順序呈現(xiàn)這些圖片，讓被測(cè)驗(yàn)者立即說出人像的姓名、職業(yè)和愛好等特點(diǎn)。如果回答正確，主試者在記錄者即說出人像的姓名、職業(yè)和愛好等特點(diǎn)。如果回答正確，主試者在記錄紙相應(yīng)格內(nèi)打“√”號(hào)，回答錯(cuò)誤，則記下說錯(cuò)的內(nèi)容，每張人像允許回憶時(shí)間30s。 口述指導(dǎo)語：“我給您看一些畫的人像，在給您看每張人像的同時(shí)，向您介紹他姓什么、職業(yè)和愛好特點(diǎn)，請(qǐng)您一邊注意看人像，一邊注意聽介紹，且要把人你和他的三個(gè)特點(diǎn)聯(lián)系起來記憶�？赐耆咳讼窈�，當(dāng)我再給您看每一張人像時(shí)，要求您立即說出他的三個(gè)特點(diǎn)，不一定按我說的順序回答，記得什么先說什么，聽明白了嗎？”，如果沒聽明白，可以重復(fù)口述一遍，直到受試者理解為止。 計(jì)分 分別記錄回憶出的姓名、職業(yè)和愛好的數(shù)目，每個(gè)姓名記2分，每項(xiàng)職業(yè)和愛好各記1分，然后以三項(xiàng)總和計(jì)分。（滿分24分） 臨床記憶量表的5個(gè)分量表都有各自的記分方法，各分量表得出的分?jǐn)?shù)均為原始分。根據(jù)這些原始分，換算量表分的等價(jià)值表，查出各分量表的量表分，計(jì)算出總量表分：然后按照不同的年齡組的總量表分的等值記憶商數(shù)換算表，即可查得記憶商（MQ）。這就作為衡量人的記憶水平的指標(biāo)。 2.8數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定 此試驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，對(duì)兩組各分測(cè)驗(yàn)量表分和記憶商可用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。自身對(duì)照可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間平行比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差劑性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差劑要求，改t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。 結(jié)果判定：在試驗(yàn)前兩組記憶商均衡的前提下，試食后試食組的記憶商高于對(duì)照組，且差異有顯著性，同時(shí)試食組試驗(yàn)后的記憶商高于其試驗(yàn)前的記憶商，且差異有顯著性，可以認(rèn)為受試樣品具有改善記憶作用。 2.9注意事項(xiàng) 2.9.2心理測(cè)驗(yàn)必須由受過訓(xùn)練的人員進(jìn)行，否則影響試驗(yàn)結(jié)果。 2.9.2測(cè)試應(yīng)當(dāng)在一個(gè)安靜的房間內(nèi)進(jìn)行。除受試者和主試者外，盡量避免有其它人在場(chǎng)。 2.9.3本量表內(nèi)有三項(xiàng)和視覺有關(guān)的分測(cè)驗(yàn)，室內(nèi)光線必須保證能看得清楚刺激圖片。盡量排除因聽力或視力不佳而影響記憶成績(jī)。 2.9.4必須注意受試者受測(cè)時(shí)的精神狀態(tài)，測(cè)驗(yàn)需在受試者情緒正常、不反對(duì)接受測(cè)試、注意力比較集中的情況下進(jìn)行。受試者是否疲倦，注意力是否集中，是否配合、對(duì)測(cè)試是否緊張，是否有信心等均需記錄在記錄紙的首頁上。 2.9.5同一受試者的測(cè)試要求一次做完。在用年齡量表分比較分測(cè)驗(yàn)成績(jī)時(shí)，必須注意不同分測(cè)驗(yàn)是否在相同的精神狀態(tài)下進(jìn)行的。 2.9.6填寫記錄必須認(rèn)真，字跡清楚。填寫時(shí)注意以下幾點(diǎn)： 2.9.6.1首頁必須逐項(xiàng)填寫，即受試者的姓名、性別和年齡，以及檢查日期和時(shí)間。 2.9.6.2填寫文化程度和職業(yè)作為了解除受試者接受測(cè)驗(yàn)的背景材料。 2.9.6.3填寫健康狀況或診斷，前一夜睡眠情況或當(dāng)時(shí)疲倦與否。 2.9.6.4對(duì)表明當(dāng)時(shí)精神狀的各項(xiàng)，如配合程度、注意力、緊張狀態(tài)、信心等也要填寫清楚。 2.9.6.5除記錄受試者記憶回答的正誤外，應(yīng)當(dāng)記下錯(cuò)誤回答的具體內(nèi)容，以備分析研究用。 2.9.6.6是否應(yīng)用記憶方法以及使用什么方法對(duì)記憶研究是有益的。在用此量表進(jìn)行研究時(shí)應(yīng)當(dāng)記錄此項(xiàng)。 2.9.6.7各項(xiàng)分測(cè)驗(yàn)成績(jī)的原始分記入首頁總結(jié)表中，要先經(jīng)復(fù)查，復(fù)查無誤方可填入原始分項(xiàng)內(nèi)。 |
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