近期,全國呼吸道傳染病監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示,鼻病毒(Rhinovirus)的活躍度值得關(guān)注。根據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心發(fā)布的最新監(jiān)測周報,在2026年第1周,鼻病毒在全國哨點醫(yī)院門急診流感樣病例中的檢測陽性率達(dá)到5.7%,位居第三;在住院嚴(yán)重急性呼吸道感染病例中,陽性率也達(dá)到6.4%-3。尤其在南方部分省份,鼻病毒已成為僅次于流感病毒的主要檢出病原體。這一監(jiān)測動態(tài)提示,在流感季,我們面臨的呼吸道感染病原體構(gòu)成是復(fù)雜且動態(tài)變化的。
在此背景下,能夠快速、準(zhǔn)確地對鼻病毒進(jìn)行病原學(xué)檢測,不僅關(guān)乎個體醫(yī)學(xué)檢測的精準(zhǔn)性,也對呼吸道傳染病的科學(xué)防控具有重要意義。而實時熒光定量PCR(qPCR)技術(shù),正是實現(xiàn)這一目標(biāo)的核心工具。
一、為何鼻病毒的檢測更具挑戰(zhàn)性?
鼻病毒并非“新型”病毒,它是引起普通感冒最常見的病原體之一。但其自身特點對檢測技術(shù)提出了特定要求:
型別極其多樣:鼻病毒擁有超過160種已知型別。這意味著檢測方法必須能夠覆蓋廣泛的型別,或具備區(qū)分不同型別的潛力,這對檢測引物/探針設(shè)計的廣譜性和特異性是巨大考驗。
無針對性的藥與疫苗:目前針對鼻病毒感染尚無特效抗病毒藥物和疫苗。因此,醫(yī)學(xué)處理更依賴于免疫支撐和避免并發(fā)癥?焖贉(zhǔn)確的檢測能有效排除流感等其他有特效藥的病原體,防止抗生素和抗流感藥物的誤用。
癥狀非特異,混合感染常見:鼻病毒感染以流涕、鼻塞、打噴嚏等上呼吸道癥狀為主,與多種呼吸道病毒感染癥狀重疊。同時,呼吸道感染混合感染率高,單純依賴癥狀難以鑒別。精準(zhǔn)的分子檢測是厘清病原體、評估病情風(fēng)險的關(guān)鍵。
二、qPCR技術(shù)如何滿足鼻病毒精準(zhǔn)檢測的需求?
實時熒光定量PCR技術(shù)之所以被視為病原體核酸檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”,在于其完美契合了上述挑戰(zhàn):
高靈敏度與寬動態(tài)范圍:該技術(shù)能夠通過指數(shù)擴增,檢測出樣本中極微量的病毒核酸(理論上可達(dá)單個拷貝)。這對于感染早期病毒載量低或鼻咽拭子取樣質(zhì)量不一的樣本至關(guān)重要。其寬達(dá)8-10個數(shù)量級的動態(tài)范圍,也能同時準(zhǔn)確定量從低到高不同濃度的樣本。
高特異性:通過設(shè)計與鼻病毒特定保守基因序列互補的引物和探針,qPCR可以精準(zhǔn)識別出鼻病毒核酸,有效避免與其他常見呼吸道病毒(如流感病毒、呼吸道合胞病毒)的交叉反應(yīng),實現(xiàn)病原學(xué)鑒別。
型別覆蓋與分型潛力:針對鼻病毒多型別的特點,可以在引物設(shè)計上靶向所有型別共有的高度保守區(qū)域,實現(xiàn)“廣譜檢測”。更進(jìn)一步,通過設(shè)計型別特異性探針或結(jié)合熔解曲線分析,部分系統(tǒng)還能實現(xiàn)主要流行型別的鑒別,為流行病學(xué)監(jiān)測提供更細(xì)致的數(shù)據(jù)。
快速與定量:一次標(biāo)準(zhǔn)的qPCR檢測可在1-2小時內(nèi)完成。其“實時定量”的能力不僅可以給出“陽性/陰性”的結(jié)果,還能通過Ct值提供病毒載量的相對半定量信息,這對于評估感染狀態(tài)、研究病毒動力學(xué)具有潛在價值。
三、多病原檢測趨勢下的技術(shù)考量
當(dāng)前呼吸道感染多病原并行的現(xiàn)象普遍,醫(yī)學(xué)研究對一次檢測同時覆蓋多種病原體的需求日益增長。這催生了“多重qPCR”檢測技術(shù),即在同一反應(yīng)體系中加入多組引物和探針,同時檢測鼻病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒等十余種常見病原體。
這對qPCR儀器提出了更高要求:需要儀器具備多通道熒光檢測能力(如4-6個光學(xué)通道),以區(qū)分不同的靶標(biāo);需要更優(yōu)異的溫控均一性,保證多重反應(yīng)體系效率一致;也需要強大的軟件分析系統(tǒng),能對復(fù)雜熒光信號進(jìn)行精準(zhǔn)解析和判讀。
面對鼻病毒等常見呼吸道病原體的持續(xù)活動,依托于qPCR技術(shù)的精準(zhǔn)分子檢測,是我們實現(xiàn)科學(xué)診斷與鑒別的重要防線。從廣譜篩查到型別鑒別,從單一檢測到多重聯(lián)檢,qPCR技術(shù)本身也在不斷發(fā)展,以滿足日益復(fù)雜的醫(yī)學(xué)環(huán)境和公共衛(wèi)生監(jiān)測需求。理解這項技術(shù)的原理與優(yōu)勢,有助于我們更好地利用這一工具,服務(wù)于個體健康與群體防控。