近期,全國(guó)呼吸道傳染病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示,鼻病毒(Rhinovirus)的活躍度值得關(guān)注。根據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心發(fā)布的最新監(jiān)測(cè)周報(bào),在2026年第1周,鼻病毒在全國(guó)哨點(diǎn)醫(yī)院門急診流感樣病例中的檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到5.7%,位居第三;在住院嚴(yán)重急性呼吸道感染病例中,陽(yáng)性率也達(dá)到6.4%-3。尤其在南方部分省份,鼻病毒已成為僅次于流感病毒的主要檢出病原體。這一監(jiān)測(cè)動(dòng)態(tài)提示,在流感季,我們面臨的呼吸道感染病原體構(gòu)成是復(fù)雜且動(dòng)態(tài)變化的。
在此背景下,能夠快速、準(zhǔn)確地對(duì)鼻病毒進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè),不僅關(guān)乎個(gè)體醫(yī)學(xué)檢測(cè)的精準(zhǔn)性,也對(duì)呼吸道傳染病的科學(xué)防控具有重要意義。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù),正是實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的核心工具。
一、為何鼻病毒的檢測(cè)更具挑戰(zhàn)性?
鼻病毒并非“新型”病毒,它是引起普通感冒最常見的病原體之一。但其自身特點(diǎn)對(duì)檢測(cè)技術(shù)提出了特定要求:
型別極其多樣:鼻病毒擁有超過(guò)160種已知型別。這意味著檢測(cè)方法必須能夠覆蓋廣泛的型別,或具備區(qū)分不同型別的潛力,這對(duì)檢測(cè)引物/探針設(shè)計(jì)的廣譜性和特異性是巨大考驗(yàn)。
無(wú)針對(duì)性的藥與疫苗:目前針對(duì)鼻病毒感染尚無(wú)特效抗病毒藥物和疫苗。因此,醫(yī)學(xué)處理更依賴于免疫支撐和避免并發(fā)癥?焖贉(zhǔn)確的檢測(cè)能有效排除流感等其他有特效藥的病原體,防止抗生素和抗流感藥物的誤用。
癥狀非特異,混合感染常見:鼻病毒感染以流涕、鼻塞、打噴嚏等上呼吸道癥狀為主,與多種呼吸道病毒感染癥狀重疊。同時(shí),呼吸道感染混合感染率高,單純依賴癥狀難以鑒別。精準(zhǔn)的分子檢測(cè)是厘清病原體、評(píng)估病情風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)鍵。
二、qPCR技術(shù)如何滿足鼻病毒精準(zhǔn)檢測(cè)的需求?
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)之所以被視為病原體核酸檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,在于其完美契合了上述挑戰(zhàn):
高靈敏度與寬動(dòng)態(tài)范圍:該技術(shù)能夠通過(guò)指數(shù)擴(kuò)增,檢測(cè)出樣本中極微量的病毒核酸(理論上可達(dá)單個(gè)拷貝)。這對(duì)于感染早期病毒載量低或鼻咽拭子取樣質(zhì)量不一的樣本至關(guān)重要。其寬達(dá)8-10個(gè)數(shù)量級(jí)的動(dòng)態(tài)范圍,也能同時(shí)準(zhǔn)確定量從低到高不同濃度的樣本。
高特異性:通過(guò)設(shè)計(jì)與鼻病毒特定保守基因序列互補(bǔ)的引物和探針,qPCR可以精準(zhǔn)識(shí)別出鼻病毒核酸,有效避免與其他常見呼吸道病毒(如流感病毒、呼吸道合胞病毒)的交叉反應(yīng),實(shí)現(xiàn)病原學(xué)鑒別。
型別覆蓋與分型潛力:針對(duì)鼻病毒多型別的特點(diǎn),可以在引物設(shè)計(jì)上靶向所有型別共有的高度保守區(qū)域,實(shí)現(xiàn)“廣譜檢測(cè)”。更進(jìn)一步,通過(guò)設(shè)計(jì)型別特異性探針或結(jié)合熔解曲線分析,部分系統(tǒng)還能實(shí)現(xiàn)主要流行型別的鑒別,為流行病學(xué)監(jiān)測(cè)提供更細(xì)致的數(shù)據(jù)。
快速與定量:一次標(biāo)準(zhǔn)的qPCR檢測(cè)可在1-2小時(shí)內(nèi)完成。其“實(shí)時(shí)定量”的能力不僅可以給出“陽(yáng)性/陰性”的結(jié)果,還能通過(guò)Ct值提供病毒載量的相對(duì)半定量信息,這對(duì)于評(píng)估感染狀態(tài)、研究病毒動(dòng)力學(xué)具有潛在價(jià)值。
三、多病原檢測(cè)趨勢(shì)下的技術(shù)考量
當(dāng)前呼吸道感染多病原并行的現(xiàn)象普遍,醫(yī)學(xué)研究對(duì)一次檢測(cè)同時(shí)覆蓋多種病原體的需求日益增長(zhǎng)。這催生了“多重qPCR”檢測(cè)技術(shù),即在同一反應(yīng)體系中加入多組引物和探針,同時(shí)檢測(cè)鼻病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒等十余種常見病原體。
這對(duì)qPCR儀器提出了更高要求:需要儀器具備多通道熒光檢測(cè)能力(如4-6個(gè)光學(xué)通道),以區(qū)分不同的靶標(biāo);需要更優(yōu)異的溫控均一性,保證多重反應(yīng)體系效率一致;也需要強(qiáng)大的軟件分析系統(tǒng),能對(duì)復(fù)雜熒光信號(hào)進(jìn)行精準(zhǔn)解析和判讀。
面對(duì)鼻病毒等常見呼吸道病原體的持續(xù)活動(dòng),依托于qPCR技術(shù)的精準(zhǔn)分子檢測(cè),是我們實(shí)現(xiàn)科學(xué)診斷與鑒別的重要防線。從廣譜篩查到型別鑒別,從單一檢測(cè)到多重聯(lián)檢,qPCR技術(shù)本身也在不斷發(fā)展,以滿足日益復(fù)雜的醫(yī)學(xué)環(huán)境和公共衛(wèi)生監(jiān)測(cè)需求。理解這項(xiàng)技術(shù)的原理與優(yōu)勢(shì),有助于我們更好地利用這一工具,服務(wù)于個(gè)體健康與群體防控。