Langendorff灌流系統(tǒng)在大動物離體心臟灌流實驗中的應(yīng)用案例
實驗概要：
Langendorff 灌流系統(tǒng)是研究離體心臟電生理活動的經(jīng)典技術(shù)。相較于在體心臟研究，該系統(tǒng)可排除神經(jīng)、體液調(diào)節(jié)的干擾，具有影響因素少、可控性強(qiáng)的顯著優(yōu)勢 —— 能夠精準(zhǔn)調(diào)控前負(fù)荷、后負(fù)荷、營養(yǎng)液成分、溫度等關(guān)鍵實驗條件。本文將圍繞豬心臟 Langendorff 離體灌流實驗，從前期準(zhǔn)備、心臟獲取與處理、離體灌流操作、多通道電生理標(biāo)測記錄及實驗注意事項等方面展開詳細(xì)闡述，以期為科研工作者提供清晰、實用的實驗指導(dǎo)。
實驗?zāi)康模?/strong>
利用Langendorff離體心臟灌流技術(shù)維持豬心臟在離體狀態(tài)下的正常生理活動；利用多通道電生理標(biāo)測技術(shù)檢測離體豬心臟ECG、場電位傳導(dǎo)方向、傳導(dǎo)速度、傳導(dǎo)離散度等電生理指標(biāo)。
實驗動物：
巴馬豬、成年豬、羊等大動物（本次分享為巴馬豬、成年豬實驗案例）
實驗方法：
Langendorff離體心臟灌流技術(shù)、多通道電生理標(biāo)測技術(shù)。
實驗原理：
1、Langendorff離體心臟灌流技術(shù)原理：離體動物心臟在恒溫恒壓條件下，將心臟套管插入主動脈，逆行灌流含氧的灌注液，由冠狀動脈灌流心肌，灌流液經(jīng)冠狀靜脈竇從右心房、右心室、肺動脈端流出，以維持離體心臟在外界正常的生理活動。
2、多通道電生理標(biāo)測技術(shù)原理：不同通道數(shù)的矩陣式記錄電極緊密貼附在可興奮樣本表面，記錄可興奮樣本電活動并將獲得的信號輸送至放大器，對信號進(jìn)行采集。
Protocol（巴馬豬實驗案例）
一、實驗前準(zhǔn)備
（一）主要試劑：
肝素鈉溶液、KH液、舒泰50、氯化鉀溶液。
（二）主要器材：
玻璃皿、扎帶、留置針、注射器、眼科鑷、眼科剪、手術(shù)刀、止血鉗、醫(yī)用肋骨剪、大動物L(fēng)angendorff 灌流系統(tǒng)、多通道電生理標(biāo)測系統(tǒng)（配備筆狀電極）等。
（三）主要溶液配方：
1、KH液
2、肝素鈉溶液：生理鹽水配制，1000 U/mL
3、氯化鉀溶液：生理鹽水配制，2M
二、豬心臟獲取與處理
1、實驗豬的體重：8~15kg，肌肉注射舒泰50（0.1mL/kg）。待實驗豬麻醉后耳緣靜脈注射肝素鈉溶液（1000 U/kg），15 min后靜脈注射2M氯化鉀溶液（1mL/kg）處死。
2、將實驗豬仰臥固定于實驗臺上，倒“T”形開胸，暴露心臟。提起肺葉，沿肺后部快速剪下心臟, 并置于預(yù)冷的KH液中。
3、迅速找到主動脈，剪去多余組織；在鑷子輔助下迅速將主動脈連接到灌流針上，用扎帶固定心臟，注入含氧（95％O2，5％CO2）KH液逆行灌注使心臟復(fù)跳。
三、Langendorff離體心臟灌流
1、將心臟轉(zhuǎn)移至 Langendorff灌流系統(tǒng)，打開調(diào)試好的灌流系統(tǒng)開始灌流，進(jìn)行后續(xù)實驗。
灌流速率：40~60 mL/min，灌流溫度：37±0.3 ℃。
四、多通道電生理標(biāo)測記錄
1、心臟穩(wěn)定 15 min后，將ECG電極放置在心臟的右心房與左心室，兩個 64 通道筆式電極分別貼附到左右心房和左右心室，記錄離體心臟自發(fā)節(jié)律下ECG、場電位傳導(dǎo)方向、傳導(dǎo)速度、傳導(dǎo)離散度等電生理指標(biāo)。
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Protocol（成年豬實驗案例）
一、實驗前準(zhǔn)備
（一）主要試劑：
舒泰注射液、肝素鈉溶液、灌注液等。
（二）主要器材：
胸骨鑿、胸腔牽開器、洗心杯、采血桶、天平、測量尺、量筒、除顫儀、大動物L(fēng)angendorff 灌流系統(tǒng)、64通道電生理標(biāo)測系統(tǒng)（配備薄膜電極）等。
（三）主要溶液配方：
灌注液：克-亨氏液(500mL)+ 白蛋白(20% 白蛋白 200mL)+ 肝素化血液(1.5L血液 +20000IU 肝素鈉)+多種維持心臟穩(wěn)定狀態(tài)的藥物(肝素化血液為保證紅細(xì)胞壓積-Hct≥20%和血紅蛋白濃度-cHg≥40g/L，要根據(jù)實驗具體情況調(diào)整配比，保障供氧)。
二、豬心臟獲取與處理
（一）稱重與麻醉
1、實驗豬的體重：90kg左右，計算麻醉用藥量。
2、舒泰注射液 (規(guī)格：250mg/5ml，用量：0.05-0.1ml/kg 體重) 麻醉。
（二）肝素化、采血
1、經(jīng)耳緣靜脈注射肝素鈉溶液 12500IU 對豬進(jìn)行肝素化。
2、割斷頸部血管(也可采用 8F 一次性使用導(dǎo)管鞘套裝從股動脈采血)，采集血液至肝素化的采血桶內(nèi)（100mL 冷的克-亨氏液和 12500IU 肝素鈉溶液混合）。
（三）開胸取心臟
1、行中線胸骨切開術(shù)：手術(shù)刀沿中線切開最外層皮膚，分離肌肉組織直至找到劍狀軟骨，并用手術(shù)刀將其切除以暴露胸骨體。接著，使用長止血鉗從胸骨體位置水平戳進(jìn)胸腔，鈍性分離心臟與胸腔壁，防止切胸骨時損傷心臟。錘擊胸骨鑿切開胸骨，使用胸骨牽張器暴露胸腔后，緩慢剪開心包膜以暴露心臟，為取心手術(shù)做準(zhǔn)備。
2、離斷主要血管，將心臟與肺葉一并摘取，放入含肝素的無菌低溫 KH 液中，沖洗去除殘留血液。剝離肺葉及多余組織，把心臟縮短主動脈至4cm，肺動脈至 3~3.5cm。
3、在鑷子輔助下將主動脈通過絲線、扎帶固定到灌流針上，然后使用注射器灌流（含氧溫?zé)酜H液）心臟使心臟泵出殘血及恢復(fù)跳動。
三、Langendorff離體心臟灌流
1、將心臟主動脈連接到主動脈插管上，并用手術(shù)縫合線系緊。打開調(diào)試好的灌流系統(tǒng)開始灌流，進(jìn)行后續(xù)實驗。
四、多通道電生理標(biāo)測記錄
1、將薄膜電極緊密貼附在心臟表面，利用多通道電生理標(biāo)測系統(tǒng)對離體豬心臟心外膜的場電位傳導(dǎo)方向、傳導(dǎo)速度、傳導(dǎo)離散度等電生理指標(biāo)進(jìn)行檢測。
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五、注意事項
1、用去離子水沖洗系統(tǒng)（冷-熱-冷），使系統(tǒng)保持潔凈，并通過調(diào)節(jié)蠕動泵，使出液口達(dá)到相應(yīng)的灌流速度；
2、KH液使用前需要提前充氧（ 95% O2 +5% CO2 ）飽和，使灌流液達(dá)到氧飽和狀態(tài)；
3、排出灌流系統(tǒng)內(nèi)空氣，使灌流液充滿整個管路；
4、打開循環(huán)水加熱系統(tǒng)，調(diào)節(jié)循環(huán)水溫度，使流出的灌流液溫度為 37 ℃左右。
標(biāo)簽：
多通道電生理標(biāo)測
大動物離體心臟灌流
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