常用核酸提取方法、步驟和注意事項介紹
著有 “玄學” 之稱的分子生物學，師兄師姐說小 M 要做的都是 “升級打怪入門級” 的實驗，然而，實驗記錄本上清晰地羅列著自己整理的堪稱完美的 (假裝看懂的 Steps) 實驗流程，可是完美的流程下，總是充斥著不絲滑的操作——
提 DNA，PCR，電泳，純化回收，構載體；提 RNA，反轉錄，文庫構建，qPCR……如何快速完成一套絕美的逆襲�。�！
那具體到實驗中，我們該選擇哪種提取方法呢？這就要看個人的實驗設計方案及實驗組的經(jīng)費情況啦！
磁珠法提取效果當然很好，但貴是真的貴，而且還得購買配套的磁力架，批量提取的話，還是不太建議的！自配試劑的優(yōu)缺點是顯而易見的，若后續(xù)實驗對核酸要求不高 (如常規(guī)的 DNA 提取，后續(xù)用做普通 PCR 擴增)，這種提取方法也可選擇。
但如果對核酸的質(zhì)量要求比較高 (如定量或文庫構建等。尤其不能忽略的是 RNA 提取中的降解和純度問題)，小 M 還是比較推薦受眾度較高的離心柱法；至于質(zhì)粒提取，考慮到純度與濃度，肯定也選擇這種性價比較高的離心柱法啦！
來來來，排隊隊，順帶開啟 Kits 介紹模式……
Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提試劑盒)：我適用于從血漿、血清、全血、組織勻漿液、痰液、動物細胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。我不僅包含 蛋白酶 K，更有核酸助沉劑助力，提取的核酸那可不團團來嘛！純化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等實驗。
Kit three (質(zhì)粒大量抽提試劑盒)：我適用于從 ≤500 mL LB 培養(yǎng)基培養(yǎng)的大腸桿菌細胞中高效的提取質(zhì)粒 DNA。RNase A 可對 RNA 進行清除，柱上去除內(nèi)毒素，Very good!
MCE 新上線核酸提取試劑盒 (離心柱型)，嘗鮮試用裝，抓緊時間領取吧！
RNA 提取后續(xù)試驗主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文庫構建等，RNA 沒提好，后面的實驗問題也是連貫性的，一個不小心可就都 game over 了。這個 RNA 提取，真的是……腦殼疼！
影響 RNA 得率低的因素很多？
抽提 RNA，當然要做到 “三從四德”。
一從：外源酶污染？NO！
二從：內(nèi)源酶活性？NO！
三從：抽提目的性？YES！
一德：使用無 RNase 耗材，選擇合適的操作環(huán)境。
二德：確定樣本后選擇合適的裂解液，樣本與裂解程度不匹配，抽提結果也會大打折扣。
三德：裂解、勻漿、抽提、洗脫——快！準！狠！
四德：衡量抽提性價比的標準是后續(xù)實驗的結果，得率不是唯一標準。即我們需要明確下一步的實驗，如果是 PCR，其實驗本身對 RNA 的質(zhì)量要求沒有那么高，而 qPCR 對 RNA 的要求相對又高點，但如果要做 cDNA 文庫構建，其對 RNA 的要求就很高了，因此 RNA 質(zhì)量便是 “經(jīng)濟基礎” 了，頗有 “一損俱損” 的感覺了。
小白: “三從四德” 我也懂，但 RNA 得率這么低具體是為什么呢？
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提 DNA，PCR，電泳，純化回收，構載體；提 RNA，反轉錄，文庫構建，qPCR……如何快速完成一套絕美的逆襲�。�！
完美操作第一步
打好科研“地基”，從核酸提取開始
核酸是遺傳信息的攜帶者，是基因表達的物質(zhì)基礎，是分子生物學研究的主要對象。如果要對核酸的結構和功能進行研究，首先就要對核酸進行提取和純化。
核酸提取是個啥？字面意思，就是把核酸從樣本中提取出來唄！
那一般常見的提取方法有哪些呢？
表 1.核酸提取的常見方法
- 提取步驟
那具體到實驗中，我們該選擇哪種提取方法呢？這就要看個人的實驗設計方案及實驗組的經(jīng)費情況啦！
磁珠法提取效果當然很好，但貴是真的貴，而且還得購買配套的磁力架，批量提取的話，還是不太建議的！自配試劑的優(yōu)缺點是顯而易見的，若后續(xù)實驗對核酸要求不高 (如常規(guī)的 DNA 提取，后續(xù)用做普通 PCR 擴增)，這種提取方法也可選擇。
但如果對核酸的質(zhì)量要求比較高 (如定量或文庫構建等。尤其不能忽略的是 RNA 提取中的降解和純度問題)，小 M 還是比較推薦受眾度較高的離心柱法；至于質(zhì)粒提取，考慮到純度與濃度，肯定也選擇這種性價比較高的離心柱法啦！
圖 1. 離心柱法核酸提取流程圖
來來來，排隊隊，順帶開啟 Kits 介紹模式……
MCE 新推出三款核酸提取純化試劑盒，均利用硅膠膜離心柱對核酸進行特異性吸附，改良的裂解液可以促進細胞充分裂解、蛋白變性、核酸釋放；改良的吸附緩沖液能有效地促進核酸結合到硅膠膜上；最后經(jīng)過洗脫即可獲得高純度核酸。
Kit one (基因組 DNA 小量抽提試劑盒)：我適用于從動物組織/細胞、酵母、大腸桿菌等樣本中有效提取并純化基因組 DNA，內(nèi)含 蛋白酶 K 可去除蛋白污染，經(jīng)純化的基因組 DNA 后續(xù)可用于 PCR、qPCR、酶切、Southern Blot 等實驗。
Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提試劑盒)：我適用于從血漿、血清、全血、組織勻漿液、痰液、動物細胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。我不僅包含 蛋白酶 K，更有核酸助沉劑助力，提取的核酸那可不團團來嘛！純化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等實驗。
Kit three (質(zhì)粒大量抽提試劑盒)：我適用于從 ≤500 mL LB 培養(yǎng)基培養(yǎng)的大腸桿菌細胞中高效的提取質(zhì)粒 DNA。RNase A 可對 RNA 進行清除，柱上去除內(nèi)毒素，Very good!
MCE 新上線核酸提取試劑盒 (離心柱型)，嘗鮮試用裝，抓緊時間領取吧！
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產(chǎn)品名稱 |
免費試用裝鏈接 |
| Genomic DNA Mini Purification Kit | Free Sample |
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Viral DNA/RNA Mini Purification Kit |
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Plasmid DNA Maxi Purification Kit |
Free Sample |
完美操作第二步
避開操作“雷區(qū)”，拿到高純度核酸
小M：Protocol 很完美，實際操作過程中，也難免會遇到各種小問題。
下面小 M 對 RNA 提取過程中常見問題進行了一一盤點。
(此處主要針對 RNA 提取，文末彩蛋有 DNA 和質(zhì)粒提取注意事項匯總哦)。RNA 提取后續(xù)試驗主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文庫構建等，RNA 沒提好，后面的實驗問題也是連貫性的，一個不小心可就都 game over 了。這個 RNA 提取，真的是……腦殼疼！
來來來，這道題，我們重點講一下。
影響 RNA 得率低的因素很多？
抽提 RNA，當然要做到 “三從四德”。
一從：外源酶污染？NO！
二從：內(nèi)源酶活性？NO！
三從：抽提目的性？YES！
一德：使用無 RNase 耗材，選擇合適的操作環(huán)境。
二德：確定樣本后選擇合適的裂解液，樣本與裂解程度不匹配，抽提結果也會大打折扣。
三德：裂解、勻漿、抽提、洗脫——快！準！狠！
四德：衡量抽提性價比的標準是后續(xù)實驗的結果，得率不是唯一標準。即我們需要明確下一步的實驗，如果是 PCR，其實驗本身對 RNA 的質(zhì)量要求沒有那么高，而 qPCR 對 RNA 的要求相對又高點，但如果要做 cDNA 文庫構建，其對 RNA 的要求就很高了，因此 RNA 質(zhì)量便是 “經(jīng)濟基礎” 了，頗有 “一損俱損” 的感覺了。
小白: “三從四德” 我也懂，但 RNA 得率這么低具體是為什么呢？
小M：還不是因為 RNA 太嬌貴，放太久會降解，環(huán)境不干凈會降解，吹口氣也能降解~
彩蛋時間到��！!
(含 DNA 和質(zhì)粒提取注意事項）
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高效、快速的 2× 濃度的即用型預混液（含溴酚藍），含有常規(guī) PCR 反應所需的所有組分（樣品 DNA，引物和水除外）。 |
| 2× Fast PCR Master Mix (with Dye)
用于快速 PCR 擴增的 2× 濃度的即用型預混液（含溴酚藍），含有除樣品 DNA、引物和水外的所有 PCR 成分。 |
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2× High-Fidelity PCR Master Mix 新型高保真高效率的即用型 PCR 擴增預混液，適用于高難度長片段的 PCR 擴增實驗。 |
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RT Master Mix for qPCR II (gDNA digester plus) 反轉錄即用型預混液，采用升級款反轉錄酶，反應更高效、快速，適用于高 GC 含量、復雜二級結構、少量 RNA 模板等。試劑盒配有 gDNA digester 可去除 RNA 模板中的基因組 DNA 污染。 |
| 2× 濃度的即用型預混液，含有 qPCR 的所有組分，只需加入樣品 DNA，引物和水即可快速高效完成 qPCR 反應。 |
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SYBR Green qPCR Master Mix (High/ Low/No ROX) 2× 濃度的即用型預混液，含有 qPCR 的所有組分， 只需加入樣品 DNA，引物和水即可快速高效完成 qPCR 反應。 |
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