液氮?dú)庀嗪蜕罾浔�箱是�?shí)現(xiàn)-140⁰C長期樣品儲(chǔ)存的常用設(shè)備。這兩種方法因?yàn)椴淮嬖谝旱�進(jìn)入樣本內(nèi)的風(fēng)險(xiǎn)，因而儲(chǔ)藏期間沒有樣本間交叉感染的危險(xiǎn)。深冷冰箱是相對較新的一種設(shè)備，從近幾年的客戶使用反饋來看，在滿載樣品的情況下能夠?qū)崿F(xiàn)-140--150⁰C的穩(wěn)定環(huán)境，得到了越來越多的應(yīng)用。液氮?dú)庀嗍歉�受廣泛認(rèn)可的方法，美國國家癌癥協(xié)會(huì)等機(jī)構(gòu)的樣本庫操作規(guī)范文件中均推薦使用液氮?dú)庀嚅L期儲(chǔ)存組織樣本。液氮?dú)庀嗍窃谝旱�容器中加入一定量液氮，樣本�?chǔ)存在容器中不與液氮直接接觸的空間。液氮容器內(nèi)氣相區(qū)間的溫度最低（容器口處）不高于-140⁰C。較少的樣本量可以使用液氮罐儲(chǔ)存，盡量使用適配凍存盒的液氮罐消耗的液氮量較大一些，但由于其取放樣品的便捷以及樣品不易落入液氮罐的特點(diǎn)，越來越多的液氮罐用戶采用了這類配置。大量的樣本對取放的便捷性及液氮加注自動(dòng)化要求更高，目前主要使用液氮儲(chǔ)存箱。通常需要液氮自動(dòng)檢測設(shè)備和自動(dòng)加注設(shè)備，包括液氮供應(yīng)罐、液氮塔和液氮管道等。

 

    液氮液相能使樣本維持在-196⁰C的低溫，是目前技術(shù)條件下所能達(dá)到的最佳樣本庫保存溫度。與液氮?dú)庀嘞啾纫旱�液相更易�?shí)施，液氮容器內(nèi)可裝滿液氮，儲(chǔ)存更多的樣本，但對盛裝樣本的凍存管等耗材的要求更高。凍存造血干細(xì)胞的血袋可以直接在液氮內(nèi)儲(chǔ)存，但凍存管不能直接放入液氮內(nèi)儲(chǔ)存，需要經(jīng)過處理，要求嚴(yán)格的可使用凍存管套對凍存管全身密封，這一方法需要更高的凍存盒和更大間隔的凍存架。簡易方法是可使用密封膜對凍存管管帽和管身接合處密封，一些常用10x10底部間隔的凍存盒即可兼容，不需要特殊的凍存管架。從目前客戶的反應(yīng)以及文獻(xiàn)來看，這一方法雖然簡易，但效果還比較可靠。

 

    監(jiān)控設(shè)備包括冰箱溫度探頭、冰箱運(yùn)行溫度記錄，液氮容器液位監(jiān)控、遠(yuǎn)程報(bào)警、視頻監(jiān)控等。超低溫冰箱和深冷冰箱都需要實(shí)時(shí)監(jiān)控溫度。盡管很多廠家在設(shè)備上有溫度測量和數(shù)據(jù)輸出裝置，不少用戶選擇另行安裝溫度探頭單獨(dú)監(jiān)控溫度。溫度探頭的位置建議放于冰箱溫度最高的底部區(qū)域以確保樣品安全。冰箱的運(yùn)行溫度記錄也是基本的要求。遠(yuǎn)程報(bào)警系統(tǒng)目前常用手機(jī)報(bào)警結(jié)合網(wǎng)絡(luò)報(bào)警。溫度探測裝置會(huì)將超過正常溫度范圍的警報(bào)通過在冰箱等設(shè)備中預(yù)制的手機(jī)SIM卡自動(dòng)給相關(guān)管理人員手機(jī)短信實(shí)時(shí)報(bào)警，同時(shí)相關(guān)信息也會(huì)通過互聯(lián)網(wǎng)或數(shù)據(jù)線向管理軟件系統(tǒng)報(bào)警。近年來視頻監(jiān)控逐漸成為很多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)配置，除了在走廊、出口等處安置常規(guī)攝像頭監(jiān)控外，在樣品處理、冷凍等關(guān)鍵操作環(huán)節(jié)安置可調(diào)焦距的高分辨率攝像頭可以遠(yuǎn)程實(shí)時(shí)監(jiān)控并記錄操作人員的操作細(xì)節(jié)是否規(guī)范，對加強(qiáng)人員管理保證樣品質(zhì)量很有幫助。

 

    樣本庫通常還需要進(jìn)行一定的樣品運(yùn)輸和轉(zhuǎn)移。-20⁰C樣本轉(zhuǎn)移一般用冷凝膠包（Gel pack），-70⁰C用干冰，-150⁰C以下用液氮運(yùn)輸罐。為避免包裹遞送因意外原因延誤，樣本包裝里需要配備至少24小時(shí)的制冷劑余量。凍存管架直接影響容器樣本存儲(chǔ)能力，需要根凍存設(shè)備、耗材的類型具體選用或定制。樣本量特別大的庫還可能用到自動(dòng)化存取設(shè)備，這一方案目前只和-80⁰C設(shè)備配套使用，需要使用特定的管理軟件凍存設(shè)備。

 

    所有來源于人的樣本都被認(rèn)為是具有潛在感染性和有害的，必須經(jīng)過相關(guān)病原體檢驗(yàn)和相應(yīng)處理才能入庫。樣品處理必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。生物安全柜能實(shí)現(xiàn)對樣本潔凈性以及操作者和環(huán)境的同時(shí)保護(hù)，但超凈臺(tái)的風(fēng)是由里到外吹的，只能保護(hù)樣本的潔凈性，不能保護(hù)操作者和環(huán)境免受潛在病原體的危害。

 

    與普通實(shí)驗(yàn)室相比，樣本庫的樣品保存時(shí)間更長，對樣本中各種成份穩(wěn)定性和完整性的保護(hù)要求更嚴(yán)格，使用數(shù)量更大，因此對耗材的性能特點(diǎn)及規(guī)格挑選有更高的要求。

 

    目前樣本庫常用的樣本存儲(chǔ)耗材是1-5ml的凍存管，其中2ml的凍存管是最常用，有些廠家把實(shí)際容量2ml和5ml的凍存管分別標(biāo)稱為1.8ml和4.5ml的工作容量以提醒使用者不要裝滿，防止液體冷凍是體積增加破壞密封性。除了常規(guī)單個(gè)使用的凍存管，還有一些按96孔板大小整版存放的凍存管，使用專門設(shè)計(jì)的形狀和管蓋，以便使用自動(dòng)化機(jī)械手臂操作。

 

    由于聚丙烯（Polypropylene, PP）能夠耐受低溫（-196⁰C），具有相對較低的液氮滲透性和較好的化學(xué)試劑耐受性（如DMSO），因此聚丙烯被最為普遍的用于制作凍存管。凍存管作為生物樣本儲(chǔ)存過程中直接與樣品接觸的物質(zhì)，其原材料的可靠性級別也直接影響了所裝載物質(zhì)的安全性。聚丙烯材料的級別可基本從四個(gè)方面去判斷：純凈性、無菌性、化學(xué)耐受性和對生物分子（細(xì)胞、蛋白、RNA和DNA等）的吸附性。

 

    美國藥典（USP）將塑料等級分為6級，其中6級塑料需進(jìn)行多項(xiàng)與細(xì)胞接觸性反應(yīng)測試，以確保其對細(xì)胞的毒性最低，可用于醫(yī)療器械產(chǎn)品的制備。因此在樣本儲(chǔ)存中建議盡量選用的塑料凍存管為超純醫(yī)用級原始樹脂，并能通過USP Class VI的測試。長期儲(chǔ)存過程中凍存管材對生物大分子的吸附性是十分重要的考慮因素。對血樣，尤其是提純的微量生物大分子樣本來說，普通的塑料管材容易在長期儲(chǔ)存中因吸附而造成樣本內(nèi)某些生物大分子濃度降低，破壞樣本的完整性。因此樣本庫中建議使用專用的性能可靠的凍存管，不建議使用微量離心管等非專用耗材。另外為了更好地長期保持密封性，美國國家腫瘤協(xié)會(huì)組織庫建議使用帶有螺紋密封的凍存管，不建議使用插拔式或者彈出蓋子式的耗材。凍存管的螺旋有內(nèi)旋和外旋之分，外旋是為超低溫冰箱設(shè)計(jì)的，內(nèi)旋是為更低的溫度比如液氮?dú)庀嗷蛏罾浔�箱設(shè)計(jì)的。但液氮內(nèi)直接存放凍存管需要對凍存管進(jìn)行進(jìn)一步的防護(hù)，以免液氮泄露。液氮泄露進(jìn)凍存管不僅容易造成凍存管在化凍時(shí)爆炸破壞樣品并危及操作者，更嚴(yán)重的后果是造成樣本間交叉感染。凍存管的無菌程度也是一個(gè)重要指標(biāo)，尤其是對于將來可能用于臨床使用的樣本，盡可能滿足或者接近2010年新版中國藥典對耗材的要求（SAL 10^-6）。

 

    對于一些體積較大的樣本，目前市面上Nalgene有一款15ml的廣口無菌凍存管可用于5-15ml的液體或者較大的組織器官儲(chǔ)存。更大的液體體積可以使用血袋。廣口無菌凍存管和血袋能夠耐受-196⁰C低溫。

 

    普通實(shí)驗(yàn)室手寫標(biāo)記的凍存管已經(jīng)很難滿足樣本庫的大容量凍存需求。一種常見的解決方案是現(xiàn)場編輯并打印一維或者二維編碼及樣本信息，然后手工粘貼到普通凍存管上。另一種解決方案是選擇廠家激光蝕刻了二維編碼的凍存管。從編碼的識(shí)別性和牢固度等多種角度比較兩種方案，后一種方案在實(shí)際應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)是顯而易見的（見下表），也是目前發(fā)展的方向。預(yù)設(shè)二維碼的耗材成本整體來看高于現(xiàn)場打印編碼方案，但打印編碼的方案對標(biāo)簽紙張、打印質(zhì)量、粘合劑都有特殊的要求，需要耐受長期低溫儲(chǔ)存及一定的濕度，普通打印紙和普通油墨容易發(fā)生標(biāo)簽脫落、字跡模糊和油墨成本如鉛等污染樣本。這些額外的成本甚至能和普通凍存管價(jià)格相當(dāng)，需要在做預(yù)算的時(shí)候加以充分考慮。紙質(zhì)的凍存盒是普通實(shí)驗(yàn)室早期使用的凍存盒，近年來已經(jīng)被聚碳酸酯的凍存盒替代，尤其是在-140⁰C以下的溫度。樣本庫對穩(wěn)定性可靠性的要求比一般實(shí)驗(yàn)室更高，建議使用聚碳酸酯的凍存盒，有些聚碳酸酯的凍存盒在需要的情況下還可以高溫高壓滅菌。有些標(biāo)準(zhǔn)尺寸的聚碳酸酯凍存盒使用底部柱形間隔可以放置10x10個(gè)2ml或2ml 以下外旋或者內(nèi)旋凍存管。同樣外部尺寸的紙質(zhì)凍存盒的間隔設(shè)計(jì)通常只能放置9X9個(gè)2ml外旋或內(nèi)旋凍存管。

 

    在樣本庫潛在樣本容量較大的情況下，需要使用二維編碼，這時(shí)預(yù)制二維編碼就體現(xiàn)出了難以替代的優(yōu)點(diǎn)。首先紙質(zhì)標(biāo)簽上打印的二維編碼經(jīng)過長期冷凍之后識(shí)別率比較低，因此目前使用的一維和二維混合打印編碼的標(biāo)簽實(shí)際上主要還是依賴一位編碼提供可靠識(shí)別。其次預(yù)制二維編碼管能夠?qū)崿F(xiàn)快速讀碼，更能滿足樣本庫高通量需求。預(yù)制二維碼的凍存管采用96孔板的儲(chǔ)存格式（SBS footprint），可使用自動(dòng)化讀碼儀一次性從底部讀取整板上所有的凍存管，從而盡量減少取樣時(shí)間，降低讀碼取樣過程中樣品升溫造成的傷害。

 

    由于不同的樣本庫在編碼讀碼設(shè)備、監(jiān)控設(shè)備、冷凍設(shè)備、耗材、樣本容量等方面有較大的差異，管理軟件通常是根據(jù)用戶的具體配置和要求量身定做的，有些情況下還需要與實(shí)驗(yàn)室其他管理軟件整合，并在后期的使用中根據(jù)需求和反饋進(jìn)一步改進(jìn)。由于管理軟件、設(shè)備及耗材編碼設(shè)備為一個(gè)整體系統(tǒng)，所以在選擇軟件時(shí)應(yīng)考慮系統(tǒng)兼容性。軟件對監(jiān)控設(shè)備、報(bào)警設(shè)備的整合、界面友好程度、可擴(kuò)展性和穩(wěn)定性也都是重要考慮因素。另外管理軟件中對樣本信息需要設(shè)置管理權(quán)限以保證樣本來源的隱私。管理軟件有設(shè)備/耗材廠家配套提供的，第三方軟件公司提供的，也有樣本庫根據(jù)自己的需求自行制作。

 

	現(xiàn)場打印條碼（自定義1D&2D編碼） •   客戶可通過軟件生成自定義的一維和二維編碼，再自行將編碼打印在冷凍標(biāo)簽上，并將便簽粘貼于普通凍存管上進(jìn)行樣品的管理 •   存在的問題：現(xiàn)場打印、粘貼標(biāo)簽工作量大，出錯(cuò)概率高，有標(biāo)簽脫落的風(fēng)險(xiǎn)，編碼識(shí)別率較低，引起樣本被油墨成份污染的風(fēng)險(xiǎn)。 •   目前樣本庫編碼的主要方案，但由于其工作量大、無法實(shí)現(xiàn)高通量自動(dòng)化的樣本管理等固有缺陷，使其難以成為未來樣本庫管理的發(fā)展方向。

	預(yù)設(shè)2D編碼凍存管     帶有二維編碼的儲(chǔ)存管，編碼通過激光蝕刻等方法與儲(chǔ)存管成為一體化，能提供高通量、高識(shí)別性、完整化、自動(dòng)化的樣本信息追蹤和管理 ，極大的節(jié)省人工成本，保證了樣品的安全性，兼容各種自動(dòng)化操作和管理系統(tǒng)，解決了現(xiàn)場打印碼的各種缺陷和弊端，是全新一代的編碼儲(chǔ)存管，也是未來樣本庫發(fā)展的趨勢。

 

編碼方式比較
	現(xiàn)場打印條碼	預(yù)設(shè)2D編碼管
設(shè)置和打印標(biāo)簽時(shí)間	費(fèi)時(shí)	無
貼標(biāo)簽時(shí)間	費(fèi)時(shí)	無
標(biāo)簽脫落風(fēng)險(xiǎn)	有	無
標(biāo)簽貼錯(cuò)風(fēng)險(xiǎn)	有	無
編碼唯一性	不一定	確保唯一
可識(shí)別性	編碼識(shí)別性較差、需借助其他信息輔助確認(rèn)	編碼識(shí)別性高，大容量同時(shí)提供數(shù)字編碼
編碼形成方式	油墨打印	激光蝕刻
抗摩擦性	差	強(qiáng)
耐腐蝕性	差	強(qiáng)
糾錯(cuò)能力	不確定	強(qiáng)
掃描效率	單管掃描	可整架掃描
凍存盒	需要	不需要