AAT熒光素鉀鹽及酶檢測、CCK-8檢測試劑盒促銷5折起!
百螢八月大促銷（一）：熒光素鉀鹽及熒光素酶檢測試劑盒七折出售
百螢生物夏促來襲，D-熒光素鉀鹽及熒光素酶檢測試劑盒七折出售（僅終端用戶），活動時間：2020.8.1至2020.8.31。需要購買的小伙伴不要錯過哦！
螢火蟲螢光素酶
最常見的報告基因是北美螢火蟲photinus pyralis的熒光素酶。該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度下（體內(nèi)）甚至沒有毒性，可用于原核和真核細(xì)胞。
圖1.在帶有NOVOstar酶標(biāo)儀（BMG Labtech）的白色96孔板中，使用Amplite 螢光素酶報告基因基因檢測試劑盒測量了螢光素酶劑量反應(yīng)。該試劑盒可在20分鐘至5小時的孵育時間內(nèi)檢測到低至0.1pg /孔的螢光素酶，而不會丟失信號強度。
Amplite 螢光素酶報告基因檢測試劑盒使用無DTT配方來定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性。該檢測基于螢火蟲熒光素酶，螢火蟲熒光素酶是一種單體的61 kD酶，可催化熒光素的兩步氧化，并在560 nm處產(chǎn)生高度熒光。試劑盒包含所有基本成分，并具有與HTS兼容優(yōu)化的“混合讀取”模式。它們具有高靈敏度，可用于需要低檢測限的測定。該試劑盒具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速、簡單且均一的生物發(fā)光測定法。
高斯螢光素酶
近年來，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因為這些報告基因較小，并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20 kD的蛋白質(zhì)，可通過氧氣催化腔腸素氧化，產(chǎn)生熒光。源自海洋co足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動物細(xì)胞中分泌出來。
圖2.用Amplite 高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒（藍(lán)線）和市售的高斯熒光素酶檢測試劑盒（紅線）在帶有NOVOstar酶標(biāo)儀（BMG Labtech）的白色96孔板中檢測了分泌的高斯熒光素酶。
Amplite 高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)與高斯熒光素酶相互作用時，該發(fā)光產(chǎn)物會產(chǎn)生非常強的熒光光。該試劑盒提供了與HTS兼容的所有基本組件。它們具有很高的靈敏度，可以在96孔和384孔微量滴定板上進(jìn)行實驗。該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容。
海腎螢光素酶
海腎螢光素酶是一種從Renilla reniformis分離的36 kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480 nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出的差異而可用于雙重報告檢測。
圖3.用Amplite Renilla熒光素酶報告基因基因檢測試劑盒在白色的96孔板中用NOVOstar酶標(biāo)儀（BMG Labtech）檢測了Renilla熒光素酶
Amplite 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒提供了一種快速，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢測海腎螢光素酶的活性。與海腎熒光素酶相互作用后，該試劑會產(chǎn)生具有強發(fā)光的產(chǎn)物。該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容。該試劑盒可測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)�？梢栽�96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行實驗。
表1.特定的螢光素酶的特異性、輔因子要求以及物理特性
|
生物名稱 |
螢光素酶 |
大�。╧Da） |
基質(zhì) |
需求 |
分泌 |
|
Photinus pyralis |
北美螢火蟲熒光素酶 |
61 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Luciola cruciata |
日本螢火蟲（Genji-botaru）螢光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Luciola italica |
意大利螢火蟲螢光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Luciola lateralis |
日本螢火蟲（Heike）螢光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Luciola mingrelica |
東歐螢火蟲熒光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Photuris pennsylvanica |
賓夕法尼亞螢火蟲螢光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Pyrophorus plagiophthalamus |
叩頭蟲螢光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Phrixothrix hirtus |
鐵蟲熒光素酶 |
64 |
D-螢光素 |
鎂，ATP |
否 |
|
Renilla reniformis |
海腎熒光素酶 |
36 |
腔腸素 |
不適用 |
否 |
|
Rluc8（海腎熒光素酶的突變體） |
36 |
腔腸素 |
不適用 |
否 | |
|
綠色海腎熒光素酶 |
36 |
腔腸素 |
不適用 |
否 | |
|
Gaussia princeps |
高斯熒光素酶 |
20 |
腔腸素 |
不適用 |
是 |
|
高斯硬腦膜熒光素酶 |
20 |
腔腸素 |
不適用 |
是 | |
|
Cypridina noctiluca |
藍(lán)藻熒光素酶 |
62 |
海螢熒光素 |
不適用 |
是 |
|
Cypridina hilgendorfii |
Cypridina (Vargula) 熒光素酶 |
62 |
海螢熒光素 |
不適用 |
是 |
|
Metridia longa |
Metridia熒光素酶 |
23.8 |
腔腸素 |
不適用 |
是 |
|
Oplophorus gracilorostris |
OLuc |
19 |
腔腸素 |
不適用 |
是 |
相關(guān)產(chǎn)品
|
分類 |
品名 |
貨號 |
Ex/Em（nm） |
備注 |
|
試劑 |
熒光素酶*重組熒光素* |
#12500 |
/ |
所有規(guī)格一律七折 |
|
D-熒光素游離酸 |
#12501/#12502/#12503 |
328/533 | ||
|
D-熒光素鉀鹽 |
#12505/#12506/#12507 |
328/533 | ||
|
D-熒光素鈉鹽 |
#12509/#12510/#12511 |
328/533 | ||
|
D-熒光素磷酸鹽 |
#12512 |
328/533 | ||
|
D-熒光素半乳糖苷 |
#12513 |
328/533 | ||
|
D-熒光素甲酯 |
#12514 |
328/533 | ||
|
D-熒光素乙酯 |
#12515 |
328/533 | ||
|
D-熒光素醋酸 |
#12516 |
328/533 | ||
|
試劑盒 |
Amplite 熒光素酶報告基因檢測試劑盒 |
#12518/#12519/#12520 |
/ | |
|
Amplite 高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒 |
#12530/#12531/#12532 |
429/466 | ||
|
Amplite 海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒 |
#12535/#12536/#12537 |
429/466 |
百螢八月大促銷（二）：CCK-8檢測試劑盒限時五折
百螢生物八月促銷第二彈：CCK-8檢測試劑盒五折出售（僅終端用戶），活動時間：即日起-2020.9.30。拿起您手中的電話，快來訂購吧！
產(chǎn)品介紹
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)是一種基于 SST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。
圖1.用CCK-8檢測試劑盒確定細(xì)胞數(shù)。 將0至100,000個細(xì)胞/孔/ 100 µL的Jurkat細(xì)胞添加到一個透明96孔板中。使用SpectraMax酶標(biāo)儀（Molecular Devices）在460nm處測量吸光度。
WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan)。WST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺;顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。MTT 具有毒性，同時其生成的甲臜需要有機溶劑溶解，會對操作人員身體造成危害。本試劑無毒，使用中無需有機溶劑，操作更加安全。
細(xì)胞活性毒性檢測方法對比
|
|
CCK-8法 |
MTT法 |
MTS法 |
SRB法 |
XTT法 |
WST-1法 |
|
溶解性 |
水溶 |
難溶 |
水溶 |
水溶 |
水溶 |
水溶 |
|
檢測波長 |
450nm |
490nm |
450nm |
510nm |
450nm |
450nm |
|
外觀 |
液體 |
固體 |
液體 |
液體 |
固體 |
液體 |
|
是否需要重新溶解 |
不需要 |
需要 |
不需要 |
需溶于Tris堿 |
需要 |
不需要 |
|
便捷性 |
+++ |
++ |
+++ |
+ |
++ |
+++ |
|
檢測效率 |
++++ |
+ |
++ |
+ |
++ |
++ |
|
可重復(fù)性 |
+++ |
+ |
++ |
++ |
+ |
++ |
|
穩(wěn)定性 |
+++ |
+ |
+ |
+++ |
+ |
++ |
|
1.MTT法：MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。
2.MTS法：以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，比色分析對顯色反應(yīng)的基本要求是：反應(yīng)應(yīng)具有較高的靈敏度和選擇性，反應(yīng)生成的有色化合物的組成恒定且較穩(wěn)定，它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)和控制好適宜的反應(yīng)條件，是比色分析的關(guān)鍵。
3.SRB法：磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用來檢測細(xì)胞增殖情況。SRB是一種粉紅色陰離子染料，易溶于水，在酸性條件下可特異性地與細(xì)胞內(nèi)組成蛋白質(zhì)的堿性氨基酸結(jié)合；在510 nm左右波長下產(chǎn)生吸收峰，吸光值與細(xì)胞量成線性正相關(guān)，故可用作細(xì)胞數(shù)的定量檢測。
4.XTT法：XTT是一種與MTT類似的四唑氮衍生物，可被活細(xì)胞線粒體脫氫酶還原成水溶性的棕色甲肷產(chǎn)物，當(dāng)XTT與電子偶合劑共同使用時，甲肷的生成量與細(xì)胞的增殖程度呈正相關(guān)。
5.WST-1法：WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜（Formazan）。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。 | ||||||
促銷產(chǎn)品
|
品名 |
貨號 |
規(guī)格 |
原價 |
促銷價 |
備注 |
|
CCK-8檢測試劑盒 |
#35000 |
1ml |
270 |
135 |
活動時間：即日起-2020.9.30 |
|
#35001 |
5ml |
590 |
295 | ||
|
#35002 |
10ml |
1140 |
570 | ||
|
#35003 |
30ml |
2750 |
1375 | ||
|
#35004 |
100ml |
5400 |
2700 |
百螢生物是美國AAT Bioquest中國區(qū)域代理商，為您提供AAT Bioquest最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、最詳盡的技術(shù)和最前沿的資訊，歡迎來電咨詢！
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